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Hoechst 33258活细胞和固定的细胞均可标记
Hoechst 33258是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料,它在嵌入双链 DNA 后释放强烈的蓝色荧光,对细胞的毒性较低,常被称为DNA探针。实验研究中Hoechst 33258常用于细胞凋亡检测,染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测,也可以用于普通的细胞核染色,或常规的DNA染色。活细胞和固定的细胞均可标记。
使用方法
配制储存液
用水配制成10mg/ml的母液于4℃避光保存。染色工作浓度0.5-10μg/ml。
A:固定的细胞或组织染色
免疫荧光染色完毕后按后续步骤进行Hoechst33258细胞核染色。如果不进行其它染色,则直接按后续步骤进行Hoechst33258细胞核染色。
1) 对于贴壁细胞或组织切片:加入适量Hoechst 33258工作液,覆盖住样品即可。对于悬浮细胞:至少加入待测染色样品体积3倍的染色液,混匀。室温放置3-5分钟。
2) 吸除Hoechst 33258染色液,用TBST、PBS或生理盐水洗涤2-3次,每次3-5分钟。
3) 封片后荧光显微镜下观察。激发波长350nm,发射波长460nm。
B:活细胞或组织染色
1) 细胞培养物中加入适量Hoechst 33258染色液,充分覆盖住待染色的样品。通常对于六孔板一个孔需加入1ml染色液,对于96孔板一个孔需加入100μl染色液。
2) 在 37℃培养细胞 10~20 分钟。
3) 用 PBS或合适的缓冲液洗细胞两次。
4) 封片后荧光显微镜下观察。激发波长350nm,发射波长460nm。
储存温度:-20℃避光