PCR技术服务

Real -Time PCR即实时监测PCR扩增产物并进行解析的方法，它是在PCR反应体系中加入荧光物质，并通过Real -Time PCR检测系统对PCR反应进程中的荧光信号强度进行实时监测，最终对实验数据进行分析处理的方法。Real -Time PCR自1996年由美国Applied Biosystems公司推出以来，广泛应用于生物研究的各个领域。目前主要有SYBR Green 染料、Taqman探针法两种。

PCR技术服务主要仪器及耗材：

旋涡振荡器 ：上海青浦泸西仪器厂产品

手握式电动匀浆机：德国FLUKO公司产品

低温冷冻离心机：Sigma（3K15）公司产品

Real-time检测仪：ABI（ABI-7300）公司产品

超纯水分离系统：美国LABCONCO公司

离心管及10μL、200μL、1000μL枪头等常规耗材均为国产；RNA提取过程中所需的离心管、枪头等耗材经过0.1%的DEPC水浸泡过一夜，121℃灭菌30min，烘干后备用。

PCR技术服务实验室试剂的操作：

1)所用的所有溶液都应该没有核酸和(或)核酸酶(DNase和RNase)污染。

2)所有PCR试剂中使用的水都应该是高质量的-新鲜蒸馏的去离子水，用0.22μm过滤的，并且是高压灭菌。

3)在20℃到25℃贮存的试剂建议加点像叠氮钠一类的抗微生物剂，在扩增试剂或样品制备试剂中加入0.025%的叠氮钠不抑制扩增反应。

4)所用试剂都应该以大体积配制，实验一下看试剂是否满意，然后分装成仅够一次使用的量进行贮存。

5)所有试剂和样品准备过程中都要使用一次性灭菌的瓶子和管子。

6)新配制的试剂在用于准备新的标本之前应该加以检验。

7)样品准备和前PCR区所使用的移液管在不使用时都应该小心保存。

本程序适用于自动PCR操作，可适用于大多数情况，所用酶是不含核酸外切酶活性的热稳定聚合酶，如Taq聚合酶等。
引物（各50pmol） 0.2mmol/L dNTPs（必须使用高质量的dNTPs，这一点非常重要。dNTPs经反复化冻后会发生降解，因此应分成小份保存。应注意混合物中四种dNTP的量要相等。

所有产品仅供科研使用，不得用于食用，医疗等其它用途。