琼脂糖凝胶4B 操作小贴士

琼脂糖凝胶4B 操作小贴士

产品简介：琼脂糖凝胶4B琼脂糖凝胶4B 是用4%浓度琼脂糖制备成的球型颗粒，作为凝胶层析介质使用。本品为乳白色球状凝胶，无嗅、无味、无肉眼可见杂质。 

保存：
产品应密封贮存在4℃~25℃（保存溶液为20%乙醇），通风、干燥、清洁的地方。不能冷冻。用过的柱子贮存在4℃（20%乙醇）。本品应避免与氧化剂接触，避免长时间暴露在空气中。

操作说明：
本产品为传统的琼脂糖介质，非特异性吸附低，回收率高，可多次重复使用等特点，用于分子量差异大、对分辨率要求不高的样品的凝胶层析纯化。
1. 装柱
凝胶过滤介质的使用对装柱的要求较高，为了保证分离效果，一般通过柱子上加一个装柱器来使分离柱装满凝胶，或采用带有轴向加压装置的柱子。凝胶柱床一般高于60cm。装柱效果可用染料或丙酮-水溶液进行检验。以下过程为通用介质装填过程。若为带有轴向加压装置的柱子，可在柱床稳定后将柱床压紧，接好管路。
(1) 让所有的材料和试剂达到室温。配制缓冲液。凝胶层析上样、平衡和洗脱只用一种低盐浓度的缓冲液。
(2) 选择一根一定直径的柱子，长约30~60cm，根据柱子大小取所需量的凝胶（约为柱床体积的1.15 倍），清洗掉20%乙醇，抽干，用缓冲液（按凝胶：缓冲液=3：1 的比例）配成匀浆。不要剧烈搅动，以免搅坏微球。
(3) 将柱内及柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液位（液面略高于滤膜），务必使底端无气泡。
(4) 用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内，注意勿使产生气泡。打开柱子出液口，使凝胶在柱内自由沉降，连结好柱子顶端柱头。
(5) 打开蠕动泵，让缓冲液缓慢流过，使柱床稳定。
(6) 最好用一个装柱器辅助装柱。装完后柱床上端轻轻刮平，上好柱头。
2. 平衡
让缓冲液以一定流速流过柱子，到流出液电导和pH 不变。
3. 上样
(1) 样品用缓冲液配制，浑浊的样品要离心和过滤后上样。含盐量过大、浓度过小的样品要先做处理，再上样。
(2) 介质对样品组分的分离是按组分分子量大小进行的，分子量大的先流出来。
(3) 上样体积约为柱体积的1~2%，越小分离越好。
4. 洗脱
用缓冲液洗脱，洗脱中保持流速、缓冲液组成不变。
5. 再生
一般用缓冲液洗到平衡，可再次使用。
6. 注意
在装柱、使用和保存柱子的时候，始终要避免柱子流干气泡进入。