超微量 Ca +2Mg +2—ATP 酶测试盒的测定意义

超微量 Ca +2Mg +2—ATP 酶测试盒的测定意义

(测红细胞)

一、测定意义：

ATP 酶存在于组织细胞及细胞器的膜上，是生物膜

上的一种蛋白酶，它在物质运送、能量转换以及信息传

递方面具有重要的作用，机体在缺氧及一些疾病状态下，

此酶活力发生一系列改变。

二、测定原理：

ATP 酶可分解 ATP 生成 ADP 及无机磷，测定无机磷的

量可判断 ATP 酶活力的高低。

三、试剂组成与配制：（试剂盒有效期 6 个月）

四、红细胞的前处理：

1、红细胞计数（见附录）或血红蛋白测定（试剂本所有售）。

2、红细胞溶血液的制备：

a、压积红细胞溶血液的制备：取肝素抗凝全血，1000

转/分，离心 10 分钟，弃上层血清，留下层压积红

细胞，取一定量的压积红细胞，加 49 倍的双蒸水，

例如取 5μL 的压积红细胞加入 245μL 双蒸水中，混

匀，使其充分溶血，对光观察直至溶液透亮。如果

预试结果太高，再将溶血液稀释成不同浓度再进行

预试后，再决定取样浓度。

b、全血红细胞溶血液的制备：取小鼠全血，轻轻摇匀，

取一定量的全血按照 1：

24 的体积比加 24 倍双蒸水，

制成 25 倍稀释的溶血液，例如取 5μL 的全血加双蒸

水 120μL 充分混匀，制成 25 倍稀释的溶血液。对光

观察直至溶液透亮。如果预试结果太高，再将溶血

液稀释成不同浓度再进行预试后，再决定取样浓度。

[注 1]：制备好的溶血液尽快进行检测，否则易失活，

因而必须在所有的准备工作做好以后再配制

溶血液。

[注 2]：用不完的抗凝全血 4℃可保存 2～3 天， -20℃

以下保存一周或者更长时间。

[注 3]：不可用磷酸盐缓冲液或含磷的试剂稀释样本。

[注 4]：预试结果将绝对吸光度值（测定管吸光度值—

对照管吸光度值）控制在 0.2 左右为宜。

附录Ⅰ：红细胞计数法

红细胞计数有以下三种方法，只需取其中一种即可以。

1、计数板直接红细胞计数：

①、红细胞稀释液的配制：柠檬酸三钠 3.8 克，甲醛

1mL，双蒸水 100mL，混匀，4℃保存。

②、取 1 支试管，加入红细胞稀释液 2mL，取抗凝全

血 10µl 加入试管稀释液中，反复吹吸数次，

再将试管颠倒数次混匀。

③、取一滴稀释血液灌入计数板。（应一次灌满，而且

不要灌得太多。）

④、用高倍镜计数左上、左下、右上、右下，中央 5

个中方格的红细胞数，将数得的数字×10 10，

即为每升血中的红细胞数。

2、光电比浊法计红细胞数：

取试管 1 支，加入上述红细胞稀释液 4mL，再

取 20µl 抗凝全血，加入 4mL 稀释液中，反复吹吸数

次，再将试管颠倒数次混匀，立即倒入比色杯中，

于 540nm，1cm 光径，双蒸水调零进行比色，记下

吸光度值。以计数板计数的红细胞的数值为横坐标，

以相应管的吸光度值为纵坐标，作标准曲线。您可

以不做曲线，用附录Ⅱ参考标准曲线图二（鼠红细

胞数与比浊法吸光度换算曲线）。根据标准曲线查出

红细胞数。

3、用血红蛋白（Hb）来换算红细胞数：

取 10µl 抗凝全血加入 2.5mL 血红蛋白测试液

（本所有供应）中，混匀，静置 10 分钟，于 540nm，

1cm 光径，双蒸水调零进行比色。将测得的吸光度

乘以 367.7 即为血红蛋白的值。以计数板计数的红细

胞的数值为横坐标，以相应管的血红蛋白数为纵坐

标，作标准曲线。您可以不做曲线，用附录Ⅱ的参

考标准曲线图一（鼠红细胞数与血红蛋白数的换算

曲线）。根据标准曲线查出红细胞数。

超微量 Ca +2Mg +2—ATP 酶测试盒的测定意义