超氧化物歧化酶（SOD）分型测定试剂盒的样本前处理

 超氧化物歧化酶（SOD）分型测定试剂盒的样本前处理

（抽提法测 T-SOD 、CuZn－SOD、 Mn-SOD 比色法）

【试剂盒介绍】

本试剂盒采用黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶

(Superoxide Dismutase SOD)活力，可测血清(浆)、脑脊液、胸水、

腹水、肾透析液、尿液、红细胞、白细胞、血小板、心肌培养

细胞、肿瘤培养细胞、各种动植物组织细胞及亚细胞水平(线粒

体、微粒体)中的 SOD 活力，并可检测微生物、药物、食品、

饮料、化妆品中的 SOD 活力。

【测定意义】

超氧化物歧化酶（SOD）对机体的氧化与抗氧化平衡起着

至关重要的作用，此酶能清除超氧阴离子自由基（O2－ ·）保护细

胞免受损伤

。

【测定原理】

通过黄嘌呤及黄嘌呤氧化酶反应系统产生超氧阴离子自由

基（O2－ ·），后者氧化羟胺形成亚硝酸盐，在显色剂的作用下呈

现紫红色，用可见光分光光度计测其吸光度。当被测样品中含

SOD 时，则对超氧阴离子自由基有专一性的抑制作用，使形成

的亚硝酸盐减少，比色时测定管的吸光度值低于对照管的吸光

度值，通过公式计算可求出被测样品中的 SOD 活力。

高等动物细胞内只有二种 SOD 即铜锌-SOD（CuZn-SOD）

与锰-SOD(Mn-SOD),二者相加等于总 SOD（T-SOD），经样本前

处理过的样本中 Mn-SOD 活力丧失，但 CuZn-SOD 活力不变。

【有效期和保存条件】

本试剂盒保存期：6 个月；贮存温度：4℃，注意 4 号贮备

液须放在-20℃以下，温度偏高酶容易失效，所用塑料吸嘴尖要

干净，最好消毒，或者用双蒸水将新吸嘴尖头反复冲洗，一定

要避免菌类及重金属离子污染。

【实验中所需的仪器和自备的试剂】

550nm 的分光光度计或酶标仪、37℃恒温水浴或气浴箱、

台式离心机、移液器、双蒸水、冰醋酸（分析纯，乙酸浓度

≥99.5%）。

【试剂组成与配制】

1、（50 管/24 样，货号 A001-2-1）试剂的组成与配制：（如您

只需做 CuZn-SOD 则可做到 48 样）

试剂一：贮备液：5mL×1 瓶（天冷时或放冰箱会有部分结晶

析出，需 37℃加热溶解后再用）；试剂一应用液的

配制：用时每瓶 5mL 贮备液加双蒸水稀释至 50mL，

4℃可保存 1 年。

试剂二：液体 5mL×1 瓶，4℃～10℃可保存 1 年。

试剂三：液体 5mL×1 瓶，4℃～10℃可保存 1 年。

试剂四：贮备液：350μL×1 支，-20℃以下保存(如需多次使用,

请在第一次解冻后分装保存)；稀释液：5mL×1 瓶，

4℃可保存 6 个月。试剂四应用液的配制:用时按贮

备液:稀释液=1∶14 比例配制，用多少配多少,现用

现配。

试剂五：粉剂×1 支，用时加入双蒸水 37.5mL(可在液面位置

标记一下)加热至 70℃～80℃溶解后备用，若加热过

程中水分蒸发减少，此时必须用双蒸水补充至标记

处，配好后的试剂避光 4℃可冷藏 1 年。

试剂六：粉剂×1 支，用时加入双蒸水 37.5mL 溶解后备用，配好

后试剂避光 4℃冷藏可保存 6 个月。

显色剂的配制：按试剂五:试剂六:冰醋酸=3:3:2 的体积比配显

色剂，用多少配多少，配好的显色剂 4℃可避光冷藏

3 个月。

试剂七：20mL×1 瓶；4℃冷藏可保存 6 个月。

2、（100 管/48 样，货号 A001-2-2）试剂的组成与配制：（如

您只需做 CuZn-SOD 则可做到 96 样）

试剂一：贮备液, 10mL×1 瓶（天冷时或放冰箱会有部分结

晶析出，需 37℃加热溶解后再用）；试剂一应用液的

配制：用时每瓶 10mL 贮备液加双蒸水稀释至

100mL，4℃可保存 1 年。

试剂二：液体 10mL×1 瓶，4℃～10℃可保存 1 年。

试剂三：液体 10mL×1 瓶，4℃～10℃可保存 1 年。

试剂四：贮备液 350μL×2 支，-20℃以下保存(如需多次使用,

请在第一次解冻后分装保存)；稀释液 10mL×1 瓶，

4℃可保存 6 个月。试剂四应用液的配制:用时按贮备

液:稀释液=1∶14 比例配制，用多少配多少,现用现

配。

试剂五：粉剂×1 支，用时加入双蒸水 75mL(可在液面位置标

记一下)加热至 70℃～80℃溶解后备用，若加热过程

中水分蒸发减少，此时必须用双蒸水补充至标记处，

配好后的试剂避光 4℃可冷藏 1 年。

试剂六：粉剂×1 支，用时加双蒸水 75mL 溶解后备用，配好后试

剂避光 4℃冷藏可保存 6 个月。

显色剂的配制：按试剂五:试剂六:冰醋酸=3:3:2 的体积比配显

色剂，用多少配多少，配好的显色剂 4℃避光可冷藏

3 个月。

试剂七：30mL×1 瓶；4℃冷藏可保存 6 个月。

【样本前处理】

1、取样本 0.2mL 加试剂七 0.2mL，旋涡混匀器充分混匀 1 分

钟后，以 3500～4000 转/分，离心 15 分钟（台式离心机），

取上清进行 CuZn-SOD 测定。此上清液即经过处理后的样

本，Mn-SOD 活力丧失而 CuZn-SOD 活力不受影响。

2、同时取生理盐水 0.2mL 加试剂七 0.2mL，旋涡混匀器充分

混匀 1 分钟后，以 3500～4000 转/分，离心 15 分钟（台式

离心机），取上清作 CuZn-SOD 对照。

注：如样本量不够可按比例减少样本和试剂用量。

 超氧化物歧化酶（SOD）分型测定试剂盒的样本前处理