高脂样本蛋白裂解液使用注意事项

高脂样本蛋白裂解液使用注意事项

描述：
高脂样本蛋白裂解液采用优化配比，特别适用于脂质含量高的样本，对动物细胞胞膜、胞浆、胞核成分有较强裂解作用，使用高脂样本蛋白裂解液特别适于提取膜蛋白以及western blot实验等

储存：
4 ℃保存 12个月有效

制备细胞裂解产物
1. 800g 4℃离心5分钟收集培养细胞，估计细胞离心后的体积（PCV, 106 cells=~20 ml, 107 cells =~100 ml PCV）；
2. 每50-100 ml PCV加入5倍体积RIPA裂解缓冲液（250-500 ml）,冰浴中放置10分钟，并每隔5分钟在漩涡混合仪上振荡30秒；
3. 12000g 4℃离心10分钟，将上清转移到新的离心管中，即得细胞总蛋白产物；
4. 假如所得蛋白产物较为粘稠，95℃加热5分钟，然后迅速冰浴5分钟，12000g 4℃离心10分钟，将上清转移到新的离心管中，即得细胞总蛋白产物。

制备组织裂解产物
1. 取50-100 mg组织在冰上剪成碎片，用预冷的PBS洗涤2次离心弃去PBS；
2. 加入 0.5-1 ml 预冷 RIPA 裂解缓冲液；
3. 4℃用玻璃匀浆器匀浆20-40次，直到95％的细胞被破碎，然后在冰浴中放置10分钟，并每隔5分钟在漩涡混合仪上振荡30秒；
4. 12000g 4℃离心10分钟，将上清转移到新的离心管中，即得组织总蛋白产物；
5. 假如所得蛋白产物较为粘稠，95℃加热5分钟，然后迅速冰浴5分钟，12000g 4℃离心10分钟，将上清转移到新的离心管中，即得组织总蛋白产物；
6. 20％的甘油保存于 -70oC 或-20oC。

注意：
1. 在转移上清液时不要吸入底部的沉淀物；
2. 高脂样本蛋白裂解液中未加入蛋白酶抑制剂。