重组蛋白L琼脂糖凝胶FF预装柱举例使用

重组蛋白L琼脂糖凝胶FF预装柱举例使用

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重组蛋白L琼脂糖凝胶FF是将重组大消化链球菌蛋白L（Recombinant Peptostreptococcus magnus Protein L，简称r-PPL）偶联在高度交联的琼脂糖凝胶上的一种亲和纯化介质。大消化链球菌蛋白L（PPL）能与抗体的κ轻链结合而不会影响抗体的抗原结合位点，这一特性使其与结合抗体Fc区域的蛋白A、蛋白G相比，能更广泛地结合各种来源及亚类的抗体。如人类的IgG、IgM、IgA、IgE、IgD，以及含κ轻链（人类1、3、4型，小鼠1型）的Fab、scFv等抗体片段。但不能与重链、λ轻链、κ轻链（2型）结合，所以重组蛋白L琼脂糖凝胶FF不能纯化牛、山羊、绵羊、鸡来源的抗体。

品  名：重组蛋白L琼脂糖凝胶FF

英文名：Recombinant Protein L NUPharose Fast Flow, rProtein L NUPharose FF

目录号：NRPB52L、NRPB52S(预装柱)

规  格：20 ml，100 ml，1L，1 ml预装柱，5 ml预装柱，特殊规格订制

运  输：2 ~ 25℃，常压、避光

贮  存：20%乙醇，2-8℃

应用举例：

结合缓冲液：20 mM磷酸盐缓冲液（PB），pH 7.4

洗脱缓冲液：0.1 M柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液，pH 2.7

中和缓冲液：1 M Tris-HCl，pH 9.0

1)1 ml重组蛋白L琼脂糖凝胶FF预装柱，用5~10个柱床体积的蒸馏水洗去保存液；

2)用结合缓冲液平衡 5~10个柱床体积；

3)将3 ml小鼠腹水用结合缓冲液稀释至15 ml，0.45 μm滤膜过滤上样；

4)用结合缓冲液平衡 5~10个柱床体积至基线；

5)用洗脱缓冲液洗脱抗体，收集洗脱峰，并用中和缓冲液调节其pH至中性；

6)每次使用后再用3~5个柱床体积的洗脱缓冲液再生清洗；

7)SDS-PAGE（图1）电泳分析洗脱下来的小鼠单抗纯度在95%以上。