考马斯亮蓝染色液正确的染色步骤

考马斯亮蓝染色液正确的染色步骤

描述：
常规考马斯亮蓝SDS-PAGE凝胶蛋白质染色是实验室常用的凝胶染色方法。银染方法虽然灵敏度高，但所需试剂复杂并且有毒有害，操作步骤繁琐，难以控制获得好的染色效果。

考马斯亮蓝有G-250和R-250两种。
游离状态的考马斯亮蓝G250 在酸性溶液中呈蓝偏绿色，与蛋白质结合后呈蓝色，蛋白质含量与颜色的深浅成正比，经595nm 测定，可作出蛋白质含量与吸光度值的标准曲线，并求出未知样品的蛋白质浓度。R-250呈蓝色，有轻微红色。

染色步骤：
1. 此染色液即为工作液，使用时直接将聚丙烯酰胺凝胶放在培养皿中以考马斯亮蓝染色液覆盖凝胶，并缓慢摇动2h；也可根据实际情况调整时间。
2. 倾去染色液，用脱色液冲洗凝胶。
3. 以脱色液覆盖凝胶，缓慢摇动2h，（或者根据时间情况调整脱色时间）倾去脱色液，再加入新脱色液进行脱色，直至获得清晰的蓝色的条带和干净的背景（通常此过程需要2～4h，也可脱色过夜至清晰的蓝色的条带和干净的背景）。
4. 对凝胶进行分析和照相，凝胶可放置在7％的乙酸中保存。也可用凝胶干胶装置（P2000）对凝胶进行处理后保存。

① 上样缓冲液中包括甘油,溴酚蓝,SDS等,甘油主要作用是防止样品漂浮出点样孔,溴酚蓝作为电泳指示剂,用来观察电泳进度,SDS用于一些核酸结合蛋白的变性解离.
②染色液与凝胶中核酸结合,以便于在紫外光下显示核酸条带.
loading buffer 的中文名字叫上样缓冲液，6kb的缓冲液中可以显示两条带，前面的紫蓝色的条带是溴酚蓝，在0.6%、1%、1.4%和2%琼脂糖凝胶电泳中，溴酚兰的迁移率分别与1Kb、0.6Kb、0.2Kb和0.15Kb的双链线性DNA片段大致相同。
后面的蓝色条带是二甲苯氰，它在1%和1.4%琼脂糖中电泳时，其迁移速率分别与2Kb和1.6Kb的双链线性DNA大致相似。而对于PAGE胶他们的迁移速率也分别不同。

安全性：
含有甲醇，无特殊毒性，按一般化学品操作规程处理。