考马斯亮蓝G250染色液的配制方法

考马斯亮蓝G250染色液的配制方法

简介

产品描述：属于三苯甲烷类染料，有G250和R250两种，可与蛋白质形成较强的非共价复合体，白-染料复合物的形成稳定染料携带的负电荷阴离子（如磺酸基），从而产生在膜上或者胶上肉眼可见的蓝色。考马斯亮蓝G250是Bradford法蛋白质定量试剂的主要成分，考马斯亮蓝R250多用于聚丙烯酰胺凝胶电泳后蛋白质条带的染色。

性状：蓝色至深紫色粉末

CAS： 6104-58-1

分子式：C47H48N3O7S2Na；分子量：854kD

溶解性：溶于热水（50mg/ml），乙醇（40mg/ml）

纯度：≥90%

Bradford法测蛋白浓度试验过程

1) 染液的配制：

将100mg的G-250溶解于50mL 95％的乙醇中，加入85％(w/V)的磷酸l00mL，加水定容至1L。

2) 标准曲线的绘制：

在7个试管中分别加入含0、10、20、30、40、50、60ug标准蛋白质溶液，用水补足到60ul，加3mL染色液，混匀后室温放置15分钟，至595nm处比色测定。以蛋白质含量为横坐标，A595的值为纵坐标绘制标准曲线。

3) 测定：

取未知浓度的样品60ul，同上测定，从标准曲线上查出相应的含量。

该方法反应快、操作简便、消耗样品少，但不同蛋白质间的差异大，标准曲线的线性不好，显色受时间和温度影响较大。考马斯亮蓝染色能力强，特别要注意比色杯的清洗。较高浓度的去污剂(Triton X-100，SDS等)、尿素和硫酸铵对测定有干扰。

染色方法：

1）考马斯亮蓝G250染色液的配制

将0.2g G250溶于100ml水中（需要加热至50°C促进溶解）。冷却后，加入100ml 2N H2S04。室温放置3h-过夜，然后滤纸除杂。过滤后的溶液，小心加入22.2ml 10N KOH，然后加入28.7g TCA。混匀后室温放置> 3h，再过滤除杂从而获得琥珀般的棕色溶液，不含蓝色沉淀。

2）染色只需将胶*浸在此染色液中，约15 min后条带就会显示出来。几小时后染色条带的亮度和灵敏度会进一步加强。

3）染色液室温约稳定存放2-3周。

保存：室温保存

备注：本公司所有产品科研使用