多酚氧化酶试剂盒正确使用！

 多酚氧化酶试剂盒正确使用！

黄至暗褐色粉末或液体。编号：EC 1.10.3.1。催化邻苯二酚氧化成邻苯二醌，也能作用于单酚单加氧酶的底物   。淡黄至暗褐色粉末或液体。溶于水，不溶于乙醇。有吸湿性。相对分子质量约为125000，适pH为6.5，适温度为2℃

PPO（EC1.10.3.1）主要存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是一种含铜的氧化酶，能使一元酚和二元酚氧化产生醌，从而引起褐化，与果蔬加工、茶叶品质和组培等密切相关。

酶蛋白具有一般蛋白质的特性，在高温或低温条件下有易变性失活的特点。各类酶均有其活性的适温度范围，一般在30C～50℃范围内酶活性*。酶若失活、变性，则就丧失了催化能力。酶的催化作用具有专一性，如多酚氧化酶，只能使茶多酚物质氧化，聚合成茶多酚的氧化产物茶黄素、茶红素和茶褐素等；蛋白酶只能促使蛋白质分解为氨基酸。茶叶加工就是利用酶具有的这种特性，用技术手段钝化或激发酶的活性，使其沿着茶类所需的要求发生酶促反应而获得各类茶*的色香味。如绿茶加工过程中的杀青就是利用高温钝化酶的活性，在短时间内制止由酶引起的一系列化学变化，形成绿叶绿汤的品质特点。红茶加工过程中的发酵就是激化酶的活性，促使茶多酚物质在多酚氧化酶的催化下发生氧化聚合反应，生成茶黄素、茶红素等氧化产物，形成红茶红叶红汤的品质特点。

实验所需仪器：

可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。

粗酶液提取：

1、收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每500万细菌或细胞加入1mL提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率20％，超声3秒，间隔10秒，重复30次）；8000g 4℃离心10分钟，取上清，置冰上待测。

2、称取约0.1g组织，加入1mL提取液进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10分钟，取上清，置冰上待测。

测定步骤：

1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至525nm，蒸馏水调零。

2、样本测定（在EP管中依次加入下列试剂）

37℃(哺乳动物)或25℃（其它物种）中准确水浴10min后，迅速放入冰浴中冷却

充分混匀，5000g，常温离心10min，收集上清，取200μL至微量石英比色皿或96孔板中，525nm处检测测定管和对照管吸光度，计算ΔA=A测定-A对照。

本产品只供科研实验用，不做其它用途！