多酚氧化酶试剂盒正确使用!
黄至暗褐色粉末或液体。编号:EC 1.10.3.1。催化邻苯二酚氧化成邻苯二醌,也能作用于单酚单加氧酶的底物 。淡黄至暗褐色粉末或液体。溶于水,不溶于乙醇。有吸湿性。相对分子质量约为125000,适pH为6.5,适温度为2℃
PPO(EC1.10.3.1)主要存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,是一种含铜的氧化酶,能使一元酚和二元酚氧化产生醌,从而引起褐化,与果蔬加工、茶叶品质和组培等密切相关。
酶蛋白具有一般蛋白质的特性,在高温或低温条件下有易变性失活的特点。各类酶均有其活性的适温度范围,一般在30C~50℃范围内酶活性*。酶若失活、变性,则就丧失了催化能力。酶的催化作用具有专一性,如多酚氧化酶,只能使茶多酚物质氧化,聚合成茶多酚的氧化产物茶黄素、茶红素和茶褐素等;蛋白酶只能促使蛋白质分解为氨基酸。茶叶加工就是利用酶具有的这种特性,用技术手段钝化或激发酶的活性,使其沿着茶类所需的要求发生酶促反应而获得各类茶*的色香味。如绿茶加工过程中的杀青就是利用高温钝化酶的活性,在短时间内制止由酶引起的一系列化学变化,形成绿叶绿汤的品质特点。红茶加工过程中的发酵就是激化酶的活性,促使茶多酚物质在多酚氧化酶的催化下发生氧化聚合反应,生成茶黄素、茶红素等氧化产物,形成红茶红叶红汤的品质特点。
实验所需仪器:
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。
粗酶液提取:
1、收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照每500万细菌或细胞加入1mL提取液,超声波破碎细菌或细胞(功率20%,超声3秒,间隔10秒,重复30次);8000g 4℃离心10分钟,取上清,置冰上待测。
2、称取约0.1g组织,加入1mL提取液进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10分钟,取上清,置冰上待测。
测定步骤:
1、分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至525nm,蒸馏水调零。
2、样本测定(在EP管中依次加入下列试剂)
试剂名称(μL) | 测定管 | 对照管 |
试剂一 | 200 | 100 |
试剂二 | 50 | 50 |
样本 | 50 | |
煮沸的样本 | 50 |
37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)中准确水浴10min后,迅速放入冰浴中冷却
试剂三 | 100 | 100 |
充分混匀,5000g,常温离心10min,收集上清,取200μL至微量石英比色皿或96孔板中,525nm处检测测定管和对照管吸光度,计算ΔA=A测定-A对照。
本产品只供科研实验用,不做其它用途!