可溶性淀粉合成酶的测定原理!
SSS(EC 2.4.1.21)通常以游离态存在于质体基质中,催化淀粉链延长,主要负责支链淀粉的合成。
检测原理:
SSS催化ADPG与淀粉引物(葡聚糖)反应,将葡萄糖分子转移到淀粉引物上,同时生成ADP,在反应体系中添加的丙酮酸激酶、己糖激酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶依次催化NADP+还原为NADPH,NADPH生成量与前一步反应中ADP生成量呈正比,340nm下测定NADPH增加量即可计算SSS活性。
活性计算:
1、按样本蛋白浓度计算:
单位的定义:每mg组织蛋白在反应体系中每分钟催化产生1nmol NADPH定义为一个酶活力单位。
GBSS活性(U/mg prot)=样本稀释倍数(6.5)÷反应时间(2min)÷NADPH消光系数(6.22×10-3)×ΔA÷蛋白质浓度(mg/mL)=522×ΔA÷蛋白质浓度(mg/mL)。
2、按照样本鲜重计算
单位的定义:每g组织在反应体系中每分钟催化产生1nmol NADPH定义为一个酶活力单位。
GBSS活性(U/g 鲜重)=样本稀释倍数(6.5)÷反应时间(2min)÷NADPH消光系数(6.22×10-3)×ΔA÷样本鲜重(g/mL) =522×ΔA÷样本鲜重(g/mL)
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