乙酸激酶检测试剂盒使用详情！

乙酸激酶检测试剂盒使用详情！

产品说明：

ACK 广泛存在于生物体内，催化乙酸和 ATP 生成乙酰磷酸和 ADP，是细菌碳代谢和能量代谢的关键酶，尤其 在古细菌甲烷合成代谢中起着中枢作用。

测定原理如下：（1）ACK 催化乙酸钠和 ATP 生成乙酰磷酸和 ADP，（2）丙酮酸激酶催化 ADP 和 PEP 生成 ATP和丙酮酸，（3）乳酸脱氢酶催化丙酮酸和 NADH 生成乳酸和 NAD+，（4）在 340nm 下测定 NADH 氧化生成 NAD+速率，即可反映 ACK 活性。

试验中所需的仪器和试剂：

台式离心机、紫外分光光度计/酶标仪、水浴锅、微量石英比色皿/ 96 孔 UV 板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、 冰、蒸馏水。

操作步骤：

一、样品处理：

1、细菌或细胞处理：

收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液，超声波破碎细菌或 胞（功率 20％，超声 3 秒，间隔 10 秒，重复 30 次），15000g，4℃，离心 20 分钟，取上清，置冰上待测。

2、组织处理：

称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆；15000g ，4℃，离心 20 分钟，取上清，置冰上待测。

3、血清（浆）：直接检测。

二、测定步骤：

1、 紫外分光光度计/酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。2、 将试剂一于 37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）保温 15min。

注意事项：

1、测定过程中样本和所有试剂在冰上放置，以免变性和失活。

2、反应液的温度必须保持 37℃或 25℃，比色皿测定时可取小烧杯一只装入一定量的 37℃或 25℃蒸馏水，将此烧放入 37℃或 25℃水浴锅中。在反应过程中把比色皿连同反应液放在此烧杯中。

3、吸光值大于 1 时，建议稀释后测量，注意计算公式乘以稀释倍数；吸光值小于 0.01 时，建议延长反应时间测量，注意计算公式变化。

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