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人热休克蛋白70(HSP-70)ELISA试剂盒技术原理:以免疫学反应为基础,将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的催化作用相结合起来
1. 抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。
2. 结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性。
3. 酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性,又保留酶的活性。
4. 受检标本与固相载体表面的抗原或抗体起反应。再加入酶标记 的抗原或抗体,也通过反应而结合在固相载体上。
5. 此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。
6. 加入酶反应的底物后,底物被酶催化成为有色产物,产物的量 与标本中受检物质的量直接相关,故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。测定方法具有很高的敏感度(pg-ng/ml水 平),并且重复性好。
我们采用的酶: 辣根过氧化酶(HRP)
1. HRP在蔬菜作物辣根中含量很高。
2. 是一种糖蛋白,含糖量约18%;分子量为44kD。
3. 是一种复合酶,由主酶(酶蛋白)和辅基(亚铁血红素)结合 而成的一种卟啉蛋白质。
4. 主酶为无色糖蛋白,在275nm波长处有zui高吸收峰;辅基是深 棕色的含铁卟啉环,在403nm波长处有zui高吸收峰。
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