甘油检测试剂盒

甘油检测试剂盒：甘油是一种非常重要的物质，广泛的应用于工业生物试剂中，在食品工业中，常被作为保湿剂、增香剂和增色剂等使用，以改良食品的质量。甘油是酿酒酵母发酵过程中的副产物,也是灰质葡萄孢新陈代谢过程中的一个重要产物，甘油是高品质果酒的一个成分，高品质的葡萄汁中不含有(或只含有痕量或微量)甘油，浓度大约为1%(v)，若葡萄汁中含有甘油则意味着产品中使用了品质不好的原料。甘油也常常作为润滑剂用在洗涤液、乳酪和牙膏中，在制烟工业中，通过通常是预先向烟叶上喷洒甘油以保障不会粉碎的目的。 

适用范围：测定血液、细胞培养基、体液、酒类饮料中的甘油浓度。

组成 ：  

R1试剂 40 ml

R2试剂 10 ml     

4 mmol/L甘油标准品1 ml

4 ºC，储存3个月。

所需设备：酶标仪、生化分析仪或721、722型可见光分光光度计。佳工作波长550nm，如无此波长建议优先选用570nm、次选530、490nm。

操作步骤：

一 样本处理：

酒类、饮品、清澈液体样本：可直接进行测定，如超过线性范围可用蒸馏水或生理盐水稀释后再测定。

培养液：取不含酚红、无颜色、无血清的细胞培养基，如有细胞碎片应4ºC,，12,000g离心5min,取上清进行测定。

血液：新鲜抗凝血，4ºC，2,000g离心5min得到血浆；非抗凝血，先4ºC静置2h得到血清后，2000g离心10min,除去血细胞。将得到的血浆/血清70ºC 加热10分钟灭活內源脂肪酶，12,000g离心10min ,取上清测定或-20ºC保存。

二 工作溶液配制：按4:1比例，取4 ml试剂R1与1 ml试剂R2混合，立即使用或4ºC保存<1天，变色弃去。

三 标准品稀释：用蒸馏水、生理盐水或与样品缓冲液一致的液体，将4 mM甘油标准品倍比稀释为1000、500、250、125、62.5、31.25、15.625、7.8125 µmol/L，通常取其中4~6管即可，注意设置0浓度对照反应管。

四 甘油浓度测定：

参见下表进行加样。为使反应时间尽量一致，减小实验误差，可先加入标准品、待测样品，然后再加入工作溶液。（注意：当甘油浓度较低时，可将待测样品与工作溶液按照100µl:100µl体积混合，然后再进行测定，但是如果样品体积超过100µl时将会稀释工作液中酶的浓度，使反应灵敏度下降。如果待测样品浓度超过线性范围，可进行适当稀释，然后根据稀释倍数来计算样品中甘油浓度。）

37ºC或25ºC反应 10分钟。反应平衡后颜色在60分钟内稳定。

先用蒸馏水+工作液的空白管调零，然后测定各管OD值。

绘制标准曲线并计算甘油浓度。

附Excel作图步骤：各标准管OD值为y轴，标准品浓度为x轴。(1)鼠标左键圈住数据，点击做图向导，选择-散点图-，点击-完成-。(2)鼠标右键点图上的某一点，点击-添加趋势线-，点击-选项-，点击-显示公式-和-R2值-。

甘油检测试剂盒