elisa试剂盒中，哪一步让你咬牙切齿

操作elisa试剂盒，说简单又简单，说复杂又复杂。虽然很多步骤都是由机器完成，但是还有例如加样，洗板，甩板等需要手工完成的工作。哪一步对你来说，又爱又恨，咬牙切齿呢？

ELISA测定现通常为采用手工操纵的以微孔板条为固相的测定模式，测定操纵非常简单，一般涉及到标本的收集保存、试剂预备、加样、温育、洗板、显色、比色、结果判定和结果报告及解释等方面，其中任一步骤的不当都会影响测定结果，且尤以加样、温育和洗板等步骤为甚。

    加血清样本及反应试剂

    在现在的ELISA商品试剂盒中，血清样本的加进几乎是惟一的要使用微量加样器加进样本的步骤。使用微量加样器加样必须留意的关键点是，加样不可太快，要避免加在孔壁上部，不可溅出和产生气泡。加样太快，无法保证微量加样的正确性和均一性。加在孔壁上部的非包被区，易导致非特异吸附。溅出会对邻近孔产生污染。出现气泡则反应液界面有差异。试剂的加进在国产试剂盒中基本上均是从滴瓶中滴加，除了要留意滴加的角度外，滴加的速度也很重要，滴加太快，很轻易出现重复滴加或加在两孑L之间的现象，这样就会在孔内的非包被区出现非特异吸附，从而引起非特异显色。所以，有时候一份标本用相同的试剂盒这次测定为阳性，下次测定为阴性，往往就是上述加样及试剂的错误所致。

    温育

    温育是ELISA测定中影响测定成败zui为关键的一个因素。ELISA作为一种固相免疫测定，抗原抗体的结合反应在固相上进行，要使液相中的抗原或抗体与固相上的特异抗体或抗原*结合，必须在一定的温度条件下反应一定的时间。温育所需时间与温度成反比，即温度越高，则所需时间相对较短。zui为常用的温育温度有37~C和室温，其次是43~C和2～8~C。

    温育这一步是ELISA测定中zui轻易出现题目的步骤。目前国内通常ELISA商品试剂盒的反应温育时间为37℃ 0．5～lh，进口ELISA试剂盒则通常为37℃ 1～2h。一般来说抗原抗体反应在37℃下需要1～2h才能有较*的结合，低于1h，可能会影响测定下限。