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RT-PCR实验代测主要仪器及耗材
旋涡振荡器 :上海青浦泸西仪器厂产品
手握式电动匀浆机:德国FLUKO 公司产品
低温冷冻离心机:Sigma(3K15)公司产品
Real-time检测仪:ABI (ABI-7300)公司产品
超纯水分离系统:美国LABCONCO公司
离心管及10μL、200μL、1000μL枪头等常规耗材均为国产;RNA提取过程中所需的离心管、枪头等耗材经过0.1%的DEPC水浸泡,121℃灭菌30min,烘干后备用。
RT-PCR实验代测操作
所用的所有溶液都应该没有核酸和(或)核酸酶(DNase和RNase)污染。
所有PCR试剂中使用的水都应该是高质量的-新鲜蒸馏的去离子水,用0.22μm过滤的,并且是高压灭菌。
在20℃到25℃贮存的试剂建议加点像叠氮钠一类的抗微生物剂,在扩增试剂或样品制备试剂中加入0.025%的叠氮钠不抑制扩增反应。
所用试剂都应该以大体积配制,实验一下看试剂是否满意,然后分装成仅够一次使用的量进行贮存。
所有试剂和样品准备过程中都要使用一次性灭菌的瓶子和管子。
新配制的试剂在用于准备新的标本之前应该加以检验。
样品准备和前PCR区所使用的移液管在不使用时都应该小心保存。
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