五分钟速成!二抗选择zui全攻略Get

当你想花zui多5分钟来选择二抗时，过程总是另你措手不及。 结合物、F (ab’)2片段、亲和纯化、轻链特异性。。。可选择性似乎太多了。不要紧，小编和你一起梳理下二抗的各种形式和类型。

通常二抗都会结合到某个分子上，以方便检测到二抗（因为一抗大多数都直接和某个抗原片段结合，直接检测很困难）。

酶标二抗

二抗常与一些酶如过氧化物酶（通常为辣根过氧化物酶，HRP）或碱性磷酸酶（AP）结合。将二抗与合适的底物孵育可以产生颜色或光以检测预期的蛋白。比色测定通常用于免疫组织化学（IHC/ICC）或ELISA，而发光底物则用于Western印迹。

生物素标记二抗

生物素（Biotin）标记的二抗通常用于扩增信号并增加检测的灵敏性，链霉亲和素（Streptavidin, SA）与Biotin特异性结合，形成SA-Biotin系统可偶联抗原、抗体、报告酶、寡核苷酸分子及荧光物质，广泛用于生物反应检测系统。

多聚复合物标记二抗

一些公司研发出多聚复合物标记的二抗和相关的检测试剂盒。

将多聚复合物标记在二抗上，形成类似于章鱼的超大抗体-酶复合物，其巨大的复合物所含分子量远高于常规复合物标记的抗体，更加灵敏和高特异性。强大的组织细胞渗透力及信号放大能力，特别适合应用于IHC及其它需要放大信号的ELISA，蛋白质印迹等。

荧光标记的二抗与荧光染料结合，通常用于流式检测（FC），细胞或组织中蛋白质的免疫荧光检测（IF）。zui近，也应用于Western印迹分析的CCD检测。

几种不同颜色的荧光染料可用于允许同时检测多种蛋白（双标或三标）。常用的荧光染料除了经典的AMCA、FITC、Cy3等，目前市面上*的的IFKine、Dylight、Alexa Fluor已然已经成为科研工作者的新宠。

动物来源

二抗必须能识别一抗。如果一抗是小鼠单克隆抗体，分离类型是小鼠IgG1，那么二抗必须选择抗小鼠IgG的抗体；同样，如果一抗来源于山羊，二抗必须选择抗山羊的抗体。

类和亚类

二抗还必须对应一抗的类和亚类。尤其是一抗是均质的单克隆抗体时，这点 特别重要。例如，一些一抗分离类型是小鼠IgM，而有一些是IgG。

购买二抗时注意分别选择抗小鼠IgM和小鼠IgG的抗体。 小鼠IgG抗体还可以分为各种亚类，如IgG1，IgG2a，IgG2b，IgG2c，IgG3。虽然可购买能识别所有亚类的一般的抗小鼠IgG二抗，但尽可能购买抗某一特定亚类的抗体以增加特异性。

大多数物种的分离类型都是IgG，物种特异性抗IgG抗体能很好地工作。但注意鸟类或禽类的免疫球蛋白为IgY。

抗重链或轻链二抗

Ig分子的基本结构是由四肽链组成的。即：由二条相同的分子量较小的肽链(轻链，Light chain)和二条相同的分子量较大的肽链(重链，Heavy chain)组成。

抗原识别结构域为Fab片段。 Fab片段是高度可变的，说明抗体抗原的特异性。每条重链和轻链还含有称为保守区的非可变区或称Fc片段。 可以购买仅识别特定部分（重链或轻链）的二抗。

zui常见的二抗类型是同时可以抗重链和轻链的抗体，表示方式为anti-Ig G(H+L)。在免疫沉淀(Immunoprecipitation, IP)和免疫共沉淀(co-Immunoprecipitation, co-IP) 实验中，常常因为有限的一抗，IP和WB的操作过程中而不得不用到相同的一抗或同种属来源的一抗，这种情况下，如果使用常规的Anti-IgG（H+L）二抗，WB实验中IP抗体变性后产生的重链（55kDa）和轻链（25kDa）都能够识别.

而此非特异的信号往往会部分甚至*掩盖目的蛋白的信号，影响实验结果。如果目标蛋白分子量小于30Kda，为了避免抗体轻链的干扰，您使用重链特异性的二抗。

F(ab’)2或Fab形式二抗

在IHC或ICC实验中，有些细胞或组织表面Fc受体较多，为避免二抗与Fc受体非特异性结合，导致高背景，F(ab’)2形式的二抗是更好的选择。

另外，F(ab’)2形式的二抗，其分子本身较小，更容易渗透到细胞、组织内，灵敏度更高。单价的Fab二抗只有一个结合位点，可以用来封闭免疫双标实验中同一物种来源的两种一抗。能有效的解决IF双标实验中，两个一抗来自同一种属时的困境。

亲和纯化二抗

抗体纯化的目的是增加抗体的特异性，需要亲和纯化的抗体通过含有目标抗原的柱子。因此，它们通常能zui大限度的减少非特异性结合。另外，亲和纯化后的抗体是高亲和力抗体，可用于检测低丰度的蛋白。

血清吸附的二抗

一些二抗通常会经过人或其它动物IgG吸附。这类抗体能减少非特异性结合，特别适合应用于一些免疫检测如IHC。如在IHC实验中，样本来源于人，则可选择经人血清吸附的二抗，以避免二抗和样本发生交叉反应，影响实验结果。

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