5’-核酸酶(5-NT)检测试剂盒(蓝微板法)的操作步骤

5’-核酸酶(5-NT)检测试剂盒(蓝微板法)的操作步骤

产品简介:

5’-核昔酸酶(5'-NT 或 NTP)广泛分布于肝脏、胆道及其他各种组织中，该酶活性变化

常与 ALP 活性相平行。但在骨骼系统的疾病中，如肿瘤骨转移、畸形性骨炎、甲亢、佝偻

病等，ALP 活力增高，但是 5-NT 活力正常，所以对于 ALP 活力提高的情况，测定 5-NT

活力有助于判断 ALP 活力增高原因是肝胆系统疾病还是骨骼系统疾病。

Leagene 5’-核首酸酶(5-NT)检测试剂盒(蓝微板法)的检测原理为 5-核首酸酶能催

化 5’-磷酸腺昔(AMP)水解，生成腺昔和磷酸，后者与酸反应生成蓝，可用比色法测

定无机磷的含量，计算 5-NT 活性，利用离子能选择性的抑制 5-NT 的特性，在测定管

不加人抑制剂镍离子，测出的活性为 ALP 和 5-NT 总活性，在对照管加入离子，可以测

出 ALP 的活性，测定管的酶活性减去对照管的酶活性即获得 5-NT 活性，通过酶标仪检测

680nm 处吸光度。5-核昔酸酶的检测对于研究自由基代谢平衡，抗衰老和肿瘤发病机制具

有一定的价值。该试剂盒仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途

自备材料:

1、蒸馏水、生理盐水

2、离心管或 EP 管

3、离心机、水浴锅

4、96 孔板、酶标仪

操作步骤(仅供参考) :

1、准备样品

①　血浆、血清和尿液样品:血浆、血清按照常规方法制备，可以直接用于该试剂盒的测定，尿液通常也可以直接用于测定，-20°C冻存，用于 5-NT 的检测

②　细胞或组织样品:取恰当细胞或组织进行裂解，可以采用 RAPI裂解液，如果有必要

需进行适当匀浆，低速离心取上清，-20°C冻存，用于 5-NT 的检测。

③　高活性样品:如果样品中含有较高活性的 5-NT，可以使用 AMP 酸性缓冲液稀释

④　(选做)样品准备完毕后可以用 BCA 蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度，以便于后续计算单位蛋白重量组织或细胞内的 5'-NT 含量

2、配制对照 NT Assay 工作液 :取适量的 NT Assay Buffer I、II、III,按I : II:III=13 :1:2的比例混合，即为对照 NT Assay 工作液，4℃保存备用。

3、配制测定 NT Assay 工作液 :取适量的 NT Assay Buffer I、II，按I:II=15 :1的比例混合，即为测定 NT Assay 工作液，4℃保存备用。

4、配制磷标准工作液:取适量的磷标准(6mmol/L)，按磷标准6mmol/L): AMP 酸性缓冲液=1:99 的比例混合，即为磷标准工作液(0.06mmol/L)，4℃保存1个月。

5、配制定磷工作液:按定磷酸性液:定磷还原液:钼酸胺溶液=6:1:1 混匀，即为定磷工作液工作液，4℃保存。

6、NT 测定:混匀，静置 5min，蒸馏水调零，酶标仪测定 680nm 处吸光度(分别记为 A空

白、A标准、A对照、 A 测定)。

注意事项

1、 本试剂盒亦可用分光光度计进行检测，但检测的样品数相应减少，如果有条件尽量采

用分光光度计检测，使其结果更为准确

2、待测样品中不能含有 5-NT 抑制剂，同时需避免反复冻融

3、用血浆测定有可能引起浑浊。

4、溶血有轻度影响，脂血症不会引起酶活性改变，但可能影响吸光度。

5、与金属鳌合的抗凝剂会干扰金属离子的激活作用，因此不宜采用金属鳌合抗凝剂

6、离心管或试管必须清洁，否则污染显色反应

有效期:6个月有效;4℃运输，4℃保存

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