ATP 含量测试盒的测定原理

ATP 含量测试盒的测定原理

（100 管/48 样）

一、检测意义：

三磷酸腺苷（adenosine 5'-triphosphate，ATP）是生物体内能量转换最基本的载体, 其含量的变化直接关系到各器官的能量代谢。ATP 作为最重要的能量分子在细胞的各种生理、病理过程中起着重要作用。ATP 水平的改变，会影响许多细胞的功能。通常细胞在凋亡、坏死或处于一些毒性状态下，ATP 水平会下降，而高葡萄糖刺激等对于一些细胞可以上调细胞内 ATP 水平。通常ATP 水平的下降表明线粒体的功能受损或下降，在细胞凋亡时 ATP 水平的下降通常和线粒体的膜电位下降同时发生状态。ATP 含量测定试剂盒可以用于检测红细胞或组织内的 ATP 水平。

二、测定原理：

肌酸激酶催化三磷酸腺苷和肌酸，生成磷酸肌酸，用磷钼酸比色法进行检测。

三、试剂组成及配制：（100 管/48 样）（本试剂盒附送双蒸水一瓶，供客户配试剂时使用）

[注]：本试剂盒中 ATP3# 粉剂-20℃冷冻保存，其余试剂 4℃保存，有效期 3 个月，开封后有效期为 1 个月。

四、样本前处理：

1、红细胞：抗凝全血取下层压积红细胞，一般按 1：4 的体积比加双蒸水进行稀释，再混匀使溶血，制备成溶血液。将制好的溶血液加入玻璃试管中沸水加热煮 10分钟，取出混匀抽提 1 分钟，4000 转/分钟离心 10 分钟，取上清液待测。

2、组织样本：准确称取组织重，按重量（g）：体积（ml）=1：9 的比例，加入 9 倍体积的冷双蒸水，冰水浴匀浆, 制成 10%的匀浆液(取出部分 3500 转/分离心 10 分钟,取上清测定蛋白浓度)，再置于沸水浴中煮 10 分钟，取出混匀抽提 1 分钟，3500 转/分离心 10 分钟，取上清液待

测。

3、培养细胞：先离心处理将细胞与培养上清分离，除去培养上清，得到下层沉淀细胞（一般细胞数量达到 106），将收集好的细胞加入 300～500μL 冷双蒸水，置于冰水浴中匀浆破碎(取出部分测定蛋白浓度)，后将细胞悬液于沸水浴中加热 10 分钟，取出混匀抽提 1 分钟，即可用于测定。[注]：混匀抽提 1 分钟即为漩涡混匀 1 分钟。

五、操作步骤：

ATP 含量测试盒的测定原理