兔抗绵羊红细胞（溶血素）的使用介绍

兔抗绵羊红细胞（溶血素）的使用介绍

利用绵羊细胞与相应抗体（溶血素）结合成的复合物，可激活血清中的补体，导致红细胞溶解，当红细胞和溶血素量一定时，在规定反应的时间内，溶血程度与补体量及活性呈正相关。在接近50%溶血（CH50）时，二者之间近似直线关系，故以50%溶血作为最敏感的判断终点。以引起50%溶血所需的最小补体量为一个 CH50U，可计算出待测血清中总的补体溶血活性，以 CH50U /ml表示。

产品全称:冻干兔抗绵羊红细胞（冻干溶血素）

规格：0.5ml*10支

效价：1:4000

批号：20230511

保存：-20℃，避光保存，避免反复冻融

有效期：12个月

使用方法：临用前，每瓶加去离子水或者双蒸水0.5ml重建后立即使用（10小时内），不得反复使用。

相关实验测定步骤：（仅供参考）

本试验主要反映补体经典活化途径的溶血功能，其结果与补体C1~C9各组成分的量及活性均有关。

1．试剂及配制

(1)缓冲生理盐水：

①贮存液：

Na2HPO4·12H20   2.85g

KH2PO4               0.27g （加蒸馏水至100毫升，4℃保存）

NaCl                    17.00g

②应用液（缓冲液）:5毫升贮存液加95毫升蒸馏水，再加10%硫酸镁0.1毫升。当日配制。12小时内使用。

(2)2%绵羊红细胞：无菌采取绵羊血液，于等量Alsever液中可保存3周。用前以缓冲液

洗3次，并配成2%细胞悬液。必要时可用吸光光度法或细胞计数法使悬液细胞浓度标准化。

(3)溶血素：将本品（效价1:4000)，用缓冲液做1:2000倍稀释（即1ml溶血素加1999毫升缓冲液）。

(4)待测血清：新鲜血液室温放置30分钟，再4℃放置60分钟，收缩。4℃离心

(3000r/min )10分钟，取上清，-20℃保存。

2．试管法操作步骤（改良 Mayer 法）

(1)致敏羊红细胞：2%绵羊红细胞加等量稀释后的溶血素（1:2000)，混匀，置37℃水浴30分钟。

(2)稀释血清：待测血清0.2ml，加缓冲液3.8ml，稀释度为1:20。

(3)配制溶血标准管：2%绵羊红细胞2ml加8ml蒸馏水，混匀，即为全溶血管。取全溶血管液2ml加缓冲液2m1，即为50%溶血管。

(4)按表所示，依次加各成分于试管中，混匀，置37℃水浴30分钟。第10管为非溶血对照。

             补体 CH50 测定试管法

结果测定：取出试管，2000r/min 离心10分钟，对照管应不溶血。肉眼比色，选与

50%溶血标准管相近二管，再用分光光度计测（波长542nm、0.5cm比色杯）OD 值，确定与标准管接近者为终点管，然后按下公式计算CH50值：血清补体CH50 ( U /ml)=(1／血清用量）x 稀释度。

如第5管为终点管，测待测血清中 CH50为66.7U/ml 。血清补体CH50正常值为50-100U/ ml 。

兔抗绵羊红细胞（溶血素）的使用介绍