加强型RIPA裂解液实验技巧

加强型RIPA裂解液实验技巧

描述： 加强型RIPA裂解液加强型对动物细胞胞膜、胞浆、胞核成分有较强裂解作用，是常用的细胞组织快速裂解液。使用加强型RIPA 裂解液特别适于提取膜蛋白以及western blot和大多数蛋白-蛋白相互作用的实验等。

储存：
4 ℃保存 12个月有效

规格：
100ml  500ml

制备细胞裂解产物
1. 800g4℃离心5分钟收集培养细胞，估计细胞离心后的体积（PCV,106cells=~20ul,107cells =~100ulPCV）；
2. 每50-100ulPCV加入5倍体积RIPA裂解缓冲液（250-500ul）,冰浴中放置10分钟，并每隔5分钟在漩涡混合仪上振荡30秒；
3. 12000g4℃离心10分钟,将上清转移到新的离心管中，即得细胞总蛋白产物；
4. 假如所得蛋白产物较为粘稠，95℃加热5分钟，然后迅速冰浴5分钟，12000g4℃离心10分钟，将上清转移到新的离心管中，即得细胞总蛋白产物。

制备组织裂解产物
1. 取50-100mg组织在冰上剪成碎片，用预冷的PBS洗涤2次离心弃去PBS；
2. 加入0.5-1ml预冷RIPA裂解缓冲液；
3. 4℃用玻璃匀浆器匀浆20-40次，直到95％的细胞被破碎，然后在冰浴中放置10分钟，并每隔5分钟在漩涡混合仪上振荡30秒；
4. 12000g4℃离心10分钟，将上清转移到新的离心管中，即得组织总蛋白产物；
5. 假如所得蛋白产物较为粘稠，95℃加热5分钟，然后迅速冰浴5分钟，12000g4℃离心10分钟，将上清转移到新的离心管中，即得组织总蛋白产物；
6. 20％的甘油保存于-70oC或-20oC。

注意：
1. 在转移上清液时不要吸入底部的沉淀物；
2. 在做免疫沉淀或免疫共沉淀时最好在实验前进行蛋白的提取，以避免某些不稳定蛋白的降解；
3. 在该RIPA裂解缓冲液中未加入蛋白酶抑制剂。