小牛肠碱性磷酸酶产品简介
中文名碱性磷酸酶,可将DNA、RNA的5’端磷酸基团去除,常用于阻止载体的自连作用:在分子克隆实验中,DNA连接酶催化DNA连接时需要有磷酸基团的存在,载体在经酶切后会在切点端保留一个磷酸基团。而载体经碱性磷酸酶去磷酸化后因5’端无磷酸基团,因而不可以和自身3’端连接。因此连接反应中载体本身会优先发生的连接反应被阻止,提高了目的片段插入率。另外,碱性磷酸酶还可制备用于5’端标记的DNA模板,以及用于该酶蛋白的脱磷酸作用等。
本品为小牛肠来源的碱性磷酸酶,可以降解几乎所有磷酸单酯,但是该酶不能水解磷酸二酯或磷酸三酯。
来源(Source)
携带小牛肠碱性磷酸酶表达质粒的酵母
质量控制(Quality Control)
无核酸外切酶、核酸内切酶、核糖核酸酶污染
热灭活(Thermal Inactivation)
在螯合剂存在下,65℃加热30 min,99%活性不可逆丧失;使用苯酚,可使酶完-全失活。
储存液条件(Storage conditions)
10 mM Tris-HCl(pH8.0),1 mM MgCl2,50 mM KCl,0.1 mM ZnCl2,50% glycerol.
活性定义(Unit definition)
在pH9.8,37℃条件下,以对硝基苯酚磷酸盐(p-nitrophenylphosphate)为底物,1分钟生成1 µmol硝基酚(p-nitrophenol)所用的碱性磷酸酶量定义为1个活力单位。
最佳pH(Optimal pH)
该酶在底物浓度高的情况下其最佳反应pH为10,在底物浓度低时,最佳pH为8,此时该酶活性较高浓度底物时稍低。
优化体系(Optimal Buffer)
AP Buffer(500 mM Tris-HCl pH9.0,10 mM MgCl2)