小牛肠碱性磷酸酶产品简介

小牛肠碱性磷酸酶产品简介

中文名碱性磷酸酶，可将DNA、RNA的5’端磷酸基团去除，常用于阻止载体的自连作用：在分子克隆实验中，DNA连接酶催化DNA连接时需要有磷酸基团的存在，载体在经酶切后会在切点端保留一个磷酸基团。而载体经碱性磷酸酶去磷酸化后因5’端无磷酸基团，因而不可以和自身3’端连接。因此连接反应中载体本身会优先发生的连接反应被阻止，提高了目的片段插入率。另外，碱性磷酸酶还可制备用于5’端标记的DNA模板，以及用于该酶蛋白的脱磷酸作用等。

本品为小牛肠来源的碱性磷酸酶，可以降解几乎所有磷酸单酯，但是该酶不能水解磷酸二酯或磷酸三酯。

来源（Source）

携带小牛肠碱性磷酸酶表达质粒的酵母

质量控制（Quality Control）

无核酸外切酶、核酸内切酶、核糖核酸酶污染

热灭活（Thermal Inactivation）

在螯合剂存在下，65℃加热30 min，99%活性不可逆丧失；使用苯酚，可使酶完-全失活。

储存液条件（Storage   conditions）

10 mM Tris-HCl（pH8.0），1 mM MgCl2，50 mM KCl，0.1 mM   ZnCl2，50% glycerol.

活性定义（Unit definition）

在pH9.8，37℃条件下，以对硝基苯酚磷酸盐（p-nitrophenylphosphate）为底物，1分钟生成1 µmol硝基酚(p-nitrophenol)所用的碱性磷酸酶量定义为1个活力单位。

最佳pH（Optimal pH）

该酶在底物浓度高的情况下其最佳反应pH为10，在底物浓度低时，最佳pH为8，此时该酶活性较高浓度底物时稍低。

优化体系（Optimal Buffer）

AP Buffer（500 mM Tris-HCl pH9.0，10 mM   MgCl2）