植物过氧化氢染色液(DAB法)适合什么样本

植物过氧化氢染色液(DAB法)适合什么样本

植物组织在胁迫环境条件下会产生多种活性氧（ROS），ROS活性非常大且极其不稳定，因此ROS的检测通常因其最终产物而定。过氧化氢是活性氧的一种。在过氧化氢酶的催化下，过氧化氢能与DAB（3,3-二氨基联苯胺四盐酸盐）迅速反应生成棕红色化合物，从而定位组织中的过氧化氢，根据基本原理也称其为DAB法。本产品就是基于以上原理，用于植物活组织中的过氧化氢染色。一般应用于较嫩的根尖、叶片等的整体染色，染色后有过氧化氢聚集的部位呈棕色至深棕色。

使用方法

1. 试剂准备：将100 mg DAB以磷酸缓冲液100 mL充分溶解，得到DAB染色工作液，避光4℃保存，一周内有效。注：DAB对光敏感，溶解过程需要避光，如果较难溶解，可通过超声、磁力搅拌等方法促进溶解。
2. 采集经胁迫（例如重金属）的植物幼苗或根尖，纯水稍洗净，置于滤纸上吸干多余的水分。将植物幼苗或根尖浸没在DAB染色工作染液中，常温避光染色2-6 h，至阳性部位出现深棕色，其余部位近无色或者呈植物本身的颜色即可。（根据植物幼嫩程度、显色程度调整染色时间）
3. 用镊子将植株幼苗或者叶片小心取出，浸入纯水中来回漂洗3-5次，置于滤纸上吸干多余水分后，浸入95%乙醇中40℃处理3-16 h，目的是脱去植株幼苗或者叶片本身的叶绿素，脱色期间可多次更换新鲜的95%乙醇。
4. 用镊子取出植株幼苗或者叶片，浸入纯水中来回漂洗3-5次，置于滤纸上吸干多余水分后，将样本转入适量DAB样本保存液中浸泡30 min，随后可取出拍照。样本可置于该保存液中常温保存一周。

注意事项

1. DAB染色工作液配制好以后需4℃避光保存，一周内使用。存放时间过久，会影响显色。
2. 因过氧化氢容易分解，且任何外在因素都可能刺激植物应激产生过氧化氢，因此植物样本需要新鲜采集，并尽快完成染色。建议做阴性及阳性空白对照组。
3. 样本染色完成后尽快拍照保存结果。
4. 操作时请穿实验服，并佩戴一次性手套。