NP40裂解液制备样本的小妙招

NP40裂解液制备样本的小妙招

NP-40 裂解液是一种比较温和的细胞组织裂解液。NP-40 裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的 PAGE、Western、免疫沉淀(immunol precipitation，IP)、免疫共沉淀(co-IP)和 ELISA 等。本产品可以用于动物、植物的细胞或组织样品，也可以用于真菌或细菌样品。NP-40 裂解液的主要成分为 Tris(pH7.4)，NaCl，1% NP-40，EDTA 以及磷酸酶抑制剂。用NP-40裂解液裂解得到的蛋白样品，可以用普利莱P1511 BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的去垢剂，不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。

储存：

4℃保存，12 个月有效

制备细胞裂解产物：

1. 800g 4℃离心5分钟收集培养细胞，而后用预冷的PBS洗涤细胞两次。估计细胞离心后的体积（PCV, 106 cells=~20 ml, 107 cells =~100 ml PCV）；

2. 每50～100 ml PCV加入5倍体积裂解液（250~500 ml）,涡旋震荡10秒，冰浴放置20分钟；

3. 12000g 4℃离心15分钟，将上清转移到新的离心管中，即得细胞总蛋白产物。

制备组织裂解产物：

1. 取50-100 mg组织在冰上剪成碎片，用预冷的PBS洗涤2次离心弃去PBS；

2. 按照每20 毫克组织加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。)

3. 4℃用玻璃匀浆器匀浆20-40次，直到95％的细胞被破碎，涡旋震荡10秒，冰浴放置20分钟；

4. 12000g 4℃离心15分钟，将上清转移到新的离心管中，即得组织总蛋白产物，可用于后续的免疫沉淀或者Western Blot等实验。

注意：

1. 在转移上清液时不要吸入底部的沉淀物；

2. 在做免疫沉淀或免疫共沉淀时好在实验前进行蛋白的提取，以避免某些不稳定蛋白的降解；

3. 在该裂解缓冲液中未加入蛋白酶抑制剂，用户可自行选择进行添加。