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T4 DNA聚合酶使用详情
T4 DNA Polymerase在模板以及引物存在的条件下,沿5’-3’方向催化合成DNA,T4 DNA Polymerase具有3'→5'外切酶活性,但不具有5'→3'外切酶活性。运输和储存方法。
聚合酶(polymerase)又称多聚酶。是专门生物催化合成脱氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)的一类酶的统称。
可分为以下几个类群:(1)依赖DNA的DNA聚合酶;(2)依赖RNA的DNA聚合酶;(3)依赖DNA的RNA聚合酶;(4)依赖RNA的RNA聚合酶。前两者是DNA聚合酶,它使DNA复制链按模板顺序延长。如在原核生物中仅就大肠杆菌中已被发现的就有三种(分别简称为PolⅠ,PolⅡ和PolⅢ等);DNA聚合酶只能在有引物的基础上,即在DNA或RNA引物的3′-OH延伸,这DNA的合成方向记为5′→3′。换言之DNA聚合酶催化反应除底物(αNTP)外,还需要Mg2+ 、模板DNA和引物,迄今细胞内尚无发现可从单体起始DNA的合成。
干冰运输。
-20℃保存。有效期一年。
应用
T4 DNA Polymerase可用于催化以下反应:DNA 5'或3'突出末端的平滑化
通过置换反应进行标记DNA探针合成
定点突变过程中第二链的合成
不依赖于连接反应的PCR产物克隆
单位定义
37℃、30分钟内催化10 nmol脱氧核糖核苷酸(dNTPs)掺入到多聚核苷酸中所需要的酶量,定义为1个活性单位 (U)。