动物组织/细胞基因组DNA提取试剂盒检测原理

 动物组织/细胞基因组DNA提取试剂盒检测原理

 本试剂盒采用可以特异性结合DNA的离心吸附柱和*的缓冲液系统，提取组织和细胞的基因组DNA。 离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司*新型材料，能够高效、专一吸附DNA，可大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。 提取的基因组DNA的片段大，纯度高，质量稳定可靠。使用本试剂盒提取的基因组DNA可用于各种常规操作，包括酶切、 PCR、文库构建、Southern杂交等实验。

1、样品的处理：
a、细胞：取 1×106
-1×107 个悬浮培养细胞，12000rpm 离心 1min 收集细胞，贴壁细胞先用胰蛋白酶消化处
理，再用预冷的 PBS 吹打成细胞悬液，然后 12000rpm 离心 1min 收集细胞，尽量除去上清，加 200ul 溶液 A，
振荡至*混匀。
b、组织：组织量不宜过大，一般不要超过 25mg，可以使用匀浆器匀浆，好用液氮研磨成粉末状，再用
预冷的 PBS 或无菌水充分悬浮，然后 12000rpm 离心 1min 收集细胞，尽量除去上清，加 200ul 溶液 A，振荡至
*混匀。
2、向悬浮液中加入 20ul 的 RNase A (10mg/ml)，55℃放置 15min。
3、加入 20ul 的蛋白酶 K( 10mg /ml )，充分颠倒混匀，55℃水浴消化，细胞消化时间较短，组织消化时间较长，
一般需要 1-3 个小时才能完成（鼠尾需要消化过夜）。消化期间可颠倒离心管混匀数次，直至样品消化*为止。
消化*的指标是：液体清亮及粘稠。
4、加入 200ul 体积溶液 B，充分颠倒混匀，如出现白色沉淀，可放置于 75℃ 15-30min，沉淀即会消失，不影
响后续实验。如溶液未变清亮，说明样品消化不*，可能导致提取的 DNA 量少及不纯，还有可能导致堵塞
吸附柱。
5、加入 200ul 无水乙醇，充分混匀，此时可能会出现絮状沉淀，不影响 DNA 的提取，可将溶液和絮状沉淀都
加入吸附柱中。
6、12000rpm 离心 1min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。

注意事项:
1、试剂盒拆封后，RNase A和蛋白酶K需放置-20℃保存。
2、样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA的片段较小且提取量也下降。
3、如果试剂盒中的溶液出现沉淀，可在65℃水浴中重新溶解后再使用，不影响效果。
4、洗脱缓冲液的体积好不少于50ul，体积过小会影响回收效率：洗脱液的pH值对洗脱效率也有影响，若需要用水做洗脱液应保证其pH值在8.0左右(可用NaOH将水的pH值调至此范围)，pH 值低于7.0会降低洗脱效率。