PCR纯化检测试剂盒
本试剂盒采用*的离心吸附柱纯化酶切、PCR 等反应液中的 DNA 片段,同时除去蛋白质、其他有机化合物、无机盐离子及寡核苷酸引物等杂质。使用本试剂盒可回收 100bp-40kb 大小的 DNA 片段,回收率可达 80%以上(小于 100bp 和大于 10kb 的 DNA 片段回收率为 30-50%)。使用本试剂盒回收的 DNA 可适用于各种常规操作,包括酶切、PCR、测序、文库筛选、连接和转化等试验。
注意事项:在使用本试剂盒前请阅读此注意事项。
1.本试剂盒适用于无选择性地回收溶液中所有 DNA 片段(可去除 50bp 以下的小片段),如需选择性地回收特定片段,同时去除其他不同大小片段,请选择琼脂糖凝胶回收试剂盒。
2. 回收率与初始 DNA 量和洗脱体积有关,初始量越少、洗脱体积越小,回收率越低。
3. 回收小于 100bp 和大于 10kb 的 DNA 片段时,可适当延长吸附和洗脱的时间。
操作步骤: (使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶体上的标签。)
1、估测 PCR 反应液或酶切反应液的体积,向其中加入 4 倍体积的结合液,充分混匀。如 PCR 反应体系为 100ul,则加入 400ul 结合液。
2、将上一步所得溶液加入一个吸附柱中(吸附柱放入收集管中),室温放置 2 分钟,12000rpm 离心 30-60 秒,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放入收集管中。注意:吸附柱大容积为 800ul,若样品体积大于 800ul 可分批加入。
3、向吸附柱中加入 600ul 漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),12000rpm 离心 30-60 秒,弃废液,将吸附柱放入收集管中。
4、向吸附柱中加入 600ul 漂洗液,12000rpm 离心 1min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。
5、12000rpm 离心 2min,尽量除去漂洗液。将吸附柱敞口置于室温或 50℃温箱放置数分钟,目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除,防止漂洗液中的乙醇影响后续的实验。
6、将吸附柱放入一个干净的离心管中,向吸附膜中央悬空滴加 30-100ul 经 65-70℃水浴预热的洗脱液,室温放置2min,12000rpm 离心 2min,收集 DNA 溶液。