考马斯亮蓝快速染色液脱色方法

考马斯亮蓝快速染色液脱色方法

常规染色脱色方法：
 1、电泳结束后，将凝胶置于培养皿内，加入染色液，确保覆盖凝胶。
 2、置于水平摇床或侧摆摇床上缓慢摇动，室温染色 1 小时或更长时间。
 3、倒出染色液（可重复使用 2-3 次）。加入脱色液，确保覆盖凝胶。
 4、置于摇床上缓慢摇动，室温脱色 4-24 小时。期间更换脱色液 2-4 次，至蓝色背景全部脱去，蛋白条带染色达到预期效果。一般脱色 1-2 小时后蛋白条带即可出现。
 5、脱色后，凝胶保存在水中，用于拍照等。水中的凝胶会发生溶涨，如需避免溶涨，可以把胶保存在含 20%甘油的水中。保存可以制备干胶。
快速染色脱色方法： 
 1、电泳结束后，将凝胶置于适量考马斯亮蓝染色液中，微波炉加热至接近沸腾或刚刚沸腾，立即停止加热。胶浓度大于 10％的凝胶比较坚韧，煮沸时不易破损；胶浓度小于 10%的凝胶，尽量避免煮沸。
 2、在染色液温度较高的情况下，随即在摇床上摇动 5-10 分钟。
 3、倒出染色液（可重复使用 2-3 次）。加入适量脱色液，确保覆盖凝胶。
 4、微波炉加热至接近沸腾或刚刚沸腾，立即停止加热。
 5、在脱色液温度较高的情况下，随即在摇床上摇动 5-10 分钟。随后通常能观察到比较清楚的蛋白条带。
 6、更换新鲜的脱色液，重复步骤 4 和步骤 5，直至蓝色背景全部脱去，蛋白条带达到预期染色效果。
 7、脱色后，凝胶保存在水中，用于拍照等。或置于含 20%甘油的水中。保存可以制备干胶。
注意事项：
 1、常规方法耗时较长，但检测灵敏度更高，染色效果更加稳定。快速方法染色脱色速度快，通常检测灵敏度略低，微波炉加热时会出现溶液暴沸导致凝胶碎裂的情况，需特别小心。另外微波炉加热加速染色液和脱色液中的乙酸挥发，好在通风橱中进行。
 2、染色时间取决于凝胶厚度和染色时温度。凝胶厚，温度低，染色时间长；凝胶薄，温度高，染色时间短。凝胶和染色液的颜色一致，在染色液中看不清凝胶时，即为充分染色。染色时间延长效果也更好。   
 3、脱色期间可以在脱色液中加入一片吸水纸，部分染料会吸附在吸水纸上，会加快脱色。脱色时间过长会导致蛋白条带的颜色变浅。
 4、操作时请穿戴实验服和一次性手套。