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谷氨酸合成酶(GOGAT)试剂盒使用手册

发布时间: 2021-01-26  点击次数: 660次
谷氨酸合成酶(GOGAT)试剂盒使用手册


产说明:
GOGAT 主要存在于原核生物、酵母菌及高等植物非绿色组织的质体中,和谷氨酰胺合成酶(GS)共同构成 GS/GOGAT 循环,参与氨同化的调控。GOGAT 以 NADH 为电子供体,催化谷氨酰胺的氨基转移到α-酮戊二酸形成两分子的谷氨酸,NADH 在 340nm 吸光度的下降速率可以反映 GOGAT 活性大小。


试验中所需的和试剂:
紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL 石英比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

 
、粗酶液提取:
细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);10000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL
提取液),进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。

二、测定步骤:
1、 紫外分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 340nm,蒸馏水调零。
2、 工作液提配置,平衡至室温。
3、 样本测定

 
注意事项:
1、测定期间样本在冰上放置,以免变性和失活。
2、好两个人同时做此实验,个人比色,个人计时,以保证实验结果的准确性。
3、当 A1 大于 1.5 或者ΔA 大于 0.6 时,建议将样用蒸馏水稀释后测定,当ΔA 过小时,可以延长酶
促反应时间(10min 或 15min)或者加大加入的样体积进行测量。
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