NADPH-细胞色素C还原酶检测试剂盒

NADPH-细胞色素C还原酶检测试剂盒

产品说明：
细胞色素 P450 酶是一组主要存在于肝脏的同工酶，在外源物质代谢中具有重要作用，尤其是
药物和毒物的代谢。NCR 作为 P450 酶系的重要一员，催化氧化型 P450 还原再生。
NCR 催化 NADPH 还原氧化型细胞色 c 生成还原型细胞色素 c，还原型细胞色素 c 在 550nm 处
有特征吸收峰；通过测定 550nm 吸光度的增加速率，来计算 NCR 活性。

自备仪器和用品：
可见分光光度计、普通离心机，超速离心机、可调式移液枪、1mL 玻璃比色皿和蒸馏水。
 

操作步骤：
一、粗酶液提取：
1、除去细胞核和线粒体等：称约 0.5g 组织，加入 4℃预冷的 1mL 试剂一，冰上充分研磨，10000g
4℃离心 30min，取上清液，转移到超速离心管中。
2、粗制微粒体：4℃，100000g，离心 60min，弃上清液。
3、除血红蛋白等杂质：向步骤 2 的沉淀中加 1mL试剂一，盖紧后充分震荡溶解，100000g 离心 30min，
弃上清液。
4、终微粒体：向步骤 3 的沉淀中加试剂二 0.5mL，盖紧后充分震荡溶解，4℃保存待测。
 

二、测定操作：
1. 分光光度计预热 30min，调节波长到 550nm，蒸馏水调零。
2. 试剂二在 37℃水浴中预热 30min。
3. 空白管：取 1mL 玻璃比色皿，依次加入 50μL 蒸馏水、900μL 试剂二、50μL 试剂三和 10μL 试
剂四，迅速混匀后于 550nm 处测定 2min 内吸光值变化，第 10s 和第 130s 吸光值分别记为 A1
和 A2，△A 空白管=A2-A1。
4. 测定管：取 1mL 玻璃比色皿，依次加入 50μL 粗酶液、900μL 试剂二、50μL 试剂三和 10μL 试
剂四，迅速混匀后于 550nm 处测定 2min 内吸光值变化，第 10s 和第 130s 吸光值分别记为 A3
和 A4，△A 测定管=A4-A3。

注意：空白管只需要做一次。