明胶酶谱法分析试剂盒厂家现货

明胶酶谱法分析试剂盒厂家现货

产品简介：

基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase, MMP)以无活性的酶原形式分泌，活化后能够降解细胞外基质的胶原蛋白，又称胶原酶。通过影响细胞外基质，胶原酶参与胚胎发育、形态发生、组织重塑等过程，并参与炎症、肿瘤、心血管、神经等许多疾病过程。血浆与组织中的MMP-2、MMP-9参与各种生理与病理过程，其在诊断和治疗中的意义日益受到重视。

酶谱法的基本过程是先将样品进行SDS-聚丙烯酰胺（SDS-PAGE，含0.1%明胶）电泳分离，然后在有二价金属离子存在的缓冲系统中使样品中的MMP-2和MMP-9恢复活性，在各自的迁移位置水解凝胶里的明胶，后用考马斯亮蓝将凝胶染色，再脱色，在蓝色背景下可出现白色条带，条带的强弱与MMP-2和MMP-9活性成正比

原理：
复性原理：在电泳过程中，SDS与样品中的MMPs结合（当然是可逆性结合），破坏其氢键、疏水键而使MMPs不能发挥其分解明胶的作用，而只有当将胶置Triton中洗脱（要是放在摇床上摇，30min/次，做2次或15min/次，4次。静置于Trition中是不妥的。）时，由于SDS被Triton结合而去除，从而使MMPs恢复了活性。

试剂盒组成与储存：
A. 2 × SDS-PAGE non-reducing buffer 1.5 ml μl, −20 ºC；
B. 10 × Substrate G, 50 ml, −20 ºC；
C. 10 × Buffer A, 50 ml, 4 ºC, 使用时用蒸馏水稀释；
D. 10 × Buffer B, 50 ml, 4 ºC, 使用时用蒸馏水稀释；
E. SDS-PAGE 凝胶蛋白质考马斯亮蓝染色液, 4 ºC。

注意事项：
1.制备聚丙烯酰胺凝胶时应注意排除气泡 。
2.明胶酶谱的活性受钙离子，锌离子，和pH值等因素的影响，因此缓冲液配制应严格准确，尽量用超纯水，孵育温度也掌握好。
3.用大梳子。
4.孵育液的pH要在7.5-7.6，复性的Triton时间长了会有絮状物，所以实验时尽量使用新鲜配置的。
5.孵育的37℃不要在CO2培养箱中，因为会改变孵育液的pH值，在普通孵箱即可。
6.明胶要4℃保存，配好后1周内使用

文献支持：
绿茶多酚EGCG增强动脉粥样硬化斑块稳定性及其相关机制研究