更明智的避免RNase污染措施包括以下几个方面

更明智的避免RNase污染措施包括以下几个方面


许多实验由于RNase的污染导致了不必要的失败。然而，外源性RNase问题可以通过小心采取预防措施和谨慎应用常识来*避免。在我们的经验中，频繁出现的外源性RNase污染有两个来源。

1.被污染的缓冲液。由于粗心的无菌操作，使缓冲液被细菌或其他微生物污染。这些微生物的生长通常是肉眼不可见的，不需要等到大量繁殖就足以引起问题。因为RNase不能通过高压灭菌去除，因此被污染或怀疑被污染的溶液必须丢弃。

2.自动移液器。如果自动移液器先前用于分配含有RNase的溶液，再使用无RNase的一次性吸头就没有意义了(例如，在小规模质粒制备过程中，更糟的是进行核糖核酸酶保护性分析中)。如果自动移液器的枪管和金属枪栓接触试管壁，它就成为散RNase的非常有效的载体。对使用橡胶手套可以避免RNase问题的迷信已经在许多实验室扎根。然而事实并非如此，依赖手套并不可靠。首先，研究者的头发和胡须更容易成为罪魁祸首，更重要的是，手套只有在与皮肤表面接触前能提供有效的保护。即使每接触一次设备都更换一次手套，也未必有用，像打开冰箱、填充冰桶、填写实验记录和称量试剂。这既不明智也不好操作。戴上手套，但要不迷信它可以防止RNase。 
 

●当处理RNA时保证自动移液器。

●将要用于RNA实验的玻璃器皿、塑料制品和缓冲液留出来。

●分成小份保存溶液和缓冲液，并将每小包装用后丢弃。避免使用已经在实验室中用于其他目的的材料和溶液。留出专门的电泳装置用于分离RNA。这些装置要用去污剂清洗，流水冲洗，乙醇冲洗干燥，之后充满3%过氧化氢，室温放置10min后，用DEPC处理过的水*冲洗电泳槽。

●用无RNase的玻璃器皿、DEPC处理过的水准备所有的溶液和缓冲液，用于RNA实验的化学药品要用一次性药匙或者敲击试剂瓶的方式取用。可能的话，用0.1%的DEPC在37℃处理溶液至少1h,之后在15 psi (1.05kg/cm2 )高压灭菌15min。

●高压灭 菌的玻璃器皿和塑料制品不能有效地灭活RNase。玻璃器皿可以在300°C烘烤4h,塑料制品可以用DEPC处理，或者用商业化的产品灭活上面的RNase。

●用声誉好的厂家的无RNase一次性移液器吸头和微量离心管。为了减少污染的机会，用无菌镊子从原包装中取这些耗材放置于实验架上。

 

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