标准菌株日常管理新概念

标准菌株日常管理新概念

1.1标准菌株概念 
GB/T 27405-2008 实验室质量控制规范食品微生物检测： 
1、标准培养物：标准菌株、标准储备菌株和工作菌株的统称。 
2、标准菌株：至少定义至属或种水平的菌株。按其特征进行分类和描述，有明确的来源。 
3、标准储备菌株：标准菌株经过一代转接后获得的同种菌株。 
4、工作菌株：由标准储备转接后获得的同种菌株。 
1.2标准菌株的应用： 各种标准、国家标准、行业标准及企业标准等的相关微生物检测，用于验收培养基(包括试剂盒)、验证方法和评估实验操作。 
2.1菌株的采集： 实验室用菌种一是到国家法定机构采购，二是购买ATCC菌种，三是科研中菌种交流。不管是哪种来源，均统一采集。采集中严格按照规范执行。要求包装可靠，采集迅速，不泄漏不污染。保证菌种合格和环境安全。采集中要有菌种传代标识。选择有资质的标准菌株的合格供应商，每批标准菌株必须附带有供应商的合格证或检测报告或说明书，来证明所采购的标准菌株是合格的。 
2.2标准菌株和验收： 实验室收到标准菌株，首先应进行符合性感官检查，记录菌株号和标准菌株来源途径信息，确保溯源性清楚。
同时还应记录标准菌株名称和数量、生物试剂日期、接收日期和有无破损等情况。 
2.3冻干标准菌株的复活： 
2.3.1开启产品包装：先用70%酒精棉擦拭外包装，从凹口处撕开产品外包装，撕掉标签上的拉片，将其贴于菌株接收、保存记录序号前面。 
2.3.2复活：选择合适的培养基和培养条件（根据生物试剂商说明或有关技术通则见附录）进行复活。菌种的活化一般是在非选择性琼脂培养基上，除非特殊情况或特别，一般不用液体培养基。冻干菌株的传代次数不得超过5代，从标准菌株保藏中心购买的冻干标准菌株为第F0代。
捏管帽处安瓿瓶（仅一次）使其释放水合液体。垂直握住安瓿瓶并轻拍之，使液体流入含小球的管底。通过挤捏压碎小球使其与液体混合，立即将拭子浸于水合液体。挤压并旋转拭子，接种于初级培养平板，接种圈的直径约为25mm，用一无菌接种环在先前接种区域划线10-20次，促使分离出单菌落。同时吸出部分菌液接种胰蛋白胨大豆肉汤管，副溶血性弧菌接种3%氯化钠菌胰蛋白胨大豆肉汤管。将接种好的平板和管立即进行培养。细菌培养温度通常为25℃或37℃。多数冻干菌株会在几天后长出，但是少数菌会表现出延滞期延长的现象，需要将正常培养时间加倍。复活后的菌株为F1代。 
2.3.3：将TSB生长的浓菌液吸0.5mL于菌株保藏管充分混匀后将液体吸出，将保藏管-18℃保存1-3年为标准储备菌株F2代。将平板上生长的良好菌株接种于营养琼脂斜面（副溶血性弧菌用3%氯化钠营养琼脂）36℃培养24h当作工作菌株，记录为F3代。 
2.4工作菌株确认方法及依据： 用无菌接种环取上述培养物，在相应的培养基平板（营养琼脂、大豆胰蛋白胨琼脂）上或相应的细菌鉴别平板（如伊红美蓝、麦康凯、BP等上划线分离单个菌落，置适宜条件下培养（若该类微生物为厌氧菌，则培养条件应为厌氧条件）以同样方法取真菌和酵母菌至SDA（萨布罗培养基）平板上或玫瑰红钠培养基平板上，23～28℃下培养7d；培养后观察是否具有典型的菌落状态，然后挑取单一纯菌落，进行革兰染色、镜检，观察其染色特征及菌体形态以确定菌种。 
2.5 污染处理： 假如在该平板上发现有其他菌落生长，则说明操作有污染或菌种不纯。要将该污染培养物做灭菌处理，寻找原因，重新分离挑选纯菌落。 
2.6菌种保存： 所有菌种均由实验室专人(双人双锁)保存于冰箱或其它保存方式。
要建立菌种登记台帐，详细记录菌种采集、保管、制备、使用、处置情况；每一种菌种一定要有检测鉴定报告（具体的的鉴定方法见ATCC提供的菌种证书方法）；
具体菌种保存方法一般为： 将复苏后肉汤与灭菌甘油按15%甘油比例（肉汤8.5mL+甘油1.5mL）混合，-30 ℃冻存，（可用2mL冻存管冻存多管），作为保藏储备菌株F1代，也可使用商品化的菌种保存管。 
2.7菌种的传代： 
2.7.1标准菌株的复苏： 
① 菌种操作应在无菌条件下进行，防止杂菌污染。 
② 每次使用和复苏时只需将小珠在平板上滚动或置肉汤中培养。 
2.7.2标准储备菌株每转接一次须进行确认。（确认方法一般为他们各自*的形态，在鉴别培养基上的形态） 
2.8 菌种的保藏： 
2.8.1将试管内菌种放入冰箱中2～8℃冷藏保存。 
2.8.2将传代并经过培养后的菌种放入冰箱中2～8℃保存。 
每支保存菌种需标明菌名、标准编号、传次、传代日期。 
2.9菌种的销毁： 
2.9.1菌种使用后或超过贮存期的应进行销毁。 
2.9.2需销毁的菌种，应用高压蒸汽（121℃）灭菌30分钟。 
2.9.3灭菌后，再进行清洗和处理。 
2.9.4销毁的菌种应做好记录。销毁时由化验负责人监督销毁，保管人员负责销毁。