多酚氧化酶测试盒的粗酶液提取

多酚氧化酶测试盒的粗酶液提取

（多酚氧化酶 Polyphenol Oxidase，PPO ，分光光度测定法）

一、测定原理：

多酚氧化酶能够催化底物酚产生醌，后者在 420nm 处有特

征性光吸收。

二、测定意义：

PPO 主要存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是一种

含铜的氧化酶，能使一元酚和二元酚氧化产生醌，从而引起褐化，

与果蔬加工、茶叶品质等密切相关；同时酚类物质对病原微生物

有抑制和杀伤作用，具有一定的抗病能力。

三、试剂盒组成(50T/24 样)：

四、自备仪器或用品：

可见光分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、

1cm 光径比色皿、研钵、蒸馏水、冰。

五、粗酶液提取:

1、组织样本：组织称重（g）：提取液体积（mL）为 1:5 或

1:10 的比例（例如取 0.2g 组织，加 1mL 提取液或 0.1g

组织加 1mL 提取液），进行冰浴匀浆；8000 转/分钟常温

离心 10min（或 4000 转/分钟离心 10min 后取上清再 4000

转/分钟离心 10min），取上清待测（取部分上清液于 90℃

以上沸水浴中反应 5min 作为除非处理的粗酶液上清）。

2、血清（浆）或果汁样本：取血清（浆）或果汁体积（mL）：

提取液体积（mL）为 1:4 或 1：9 的比例（例如取 0.2mL

血清（浆）或果汁加入 0.8mL 提取液，或者取 0.1mL 血

清（浆）或果汁加入 0.9mL 提取液），涡旋混匀抽提 1min；

8000 转/分钟常温离心 10min（或 4000 转/分钟离心 10min

后取上清再 4000 转/分钟离心 10min），取上清待测（取

出部分上清液于 90℃以上沸水浴中反应 5min 作为除非

处理的粗酶液上清）。

3、细菌或培养细胞：可用称重法或细胞计数法,详情参考 注

意事项 。

八、注意事项:

1、细菌或细胞样本前处理：A:称重法：提取时可以先取离心

管用万分之一天平称重，再收集细菌或细胞到离心管内，

1000 转/分钟离心 5min 后弃上清，再次称重，减去空离心

管重量，再按 2（mg）：1000（μL）或 1（mg）：1000（μL）

的比例加入提取液，超声破碎（冰浴，功率 20%或 200W，

超声 3s、间隔 10s，重复 30 次），8000 转/分钟 4℃离心

10min，取上清待测，结果按照组织计算方法计算；B：细

胞个数法：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；

按照细菌或细胞数量（10 4个）：提取液体积为 500～1000:1

的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液），超声

波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20%或 200W，超声 3s、

间隔 10s，重复 30 次）；8000 转/分钟常温离心 10min，取

上清待测

2、粗酶液提取完，吸出一部分在 90℃以上水浴中煮沸 5min，

取出流水冷却，作为对照管煮沸的上清用。

3、试剂一在使用前先混匀使其分散后，再吸取进行提取。

4、本实验组织/细胞样本用试剂一提取很重要，提取后的粗酶

液除了测定蛋白以外，不能用于测定其他指标，以防止产

生干扰。

多酚氧化酶测试盒的粗酶液提取