5´-核苷酸酶（5´-NT）的测定试剂盒的注意点

5´-核苷酸酶（5´-NT）的测定试剂盒的注意点

（比色法）

一、测定意义：

5´-核苷酸酶（5´-NT）广泛分布于肝脏、胆道系统及各

种器官和组织中。血清中此酶活力增高（2～6）主要见于胆

道系统疾病，如阻塞性黄疸，原发性及继发性肝癌等，且通

常与 ALP 的活力变化相平行。其增高机理是因高浓度的胆

盐促使 5´-NT 从细胞膜上溶解出来，或膜通透性改变所致，

在骨骼系统的疾患如肿瘤转移、畸形性骨炎、甲状旁腺机能

亢进、佝偻病等，ALP 活力通常增高，而 5´-NT 仍为正常

或为临界值。所以对 ALP 活力增高患者，测定此酶有助于

判断 ALP 活力增高是胆道系统疾病还是骨骼系统疾病引

起。此外，妊娠妇女及儿童期 5´-NT 不增高，但 ALP 均升

高。

二、测定原理

5´-核苷酸酶（5´-NT）催化腺苷-5´-磷酸水解，生成腺

苷和无机磷。测定产物无机磷的含量，代表 5´-NT 活力。可

以用抑制剂去除其他酶的影响。

三、试剂组成与配制：（100T/48 样）

试剂一：液体 80mL×1 瓶，4℃冷藏 6 个月；过饱和溶液，

会有针状结晶析出，取上清使用。

试剂二：液体 12mL×1 瓶，4℃冷藏 6 个月。

试剂三：液体 6mL×1 瓶。4℃冷藏 6 个月。

试剂四：粉剂 2 支，稀释液 6mL×2 支，4℃冷藏 1 年。临用

时将1支粉剂倒入1支稀释液中，混匀溶解（现

用现配），配好后 4℃可保存二周。

试剂五：液体 60mL×2 瓶，该试剂有腐蚀性,尽量不要碰到

皮肤上，4℃保存 1 年。

试剂六：液体 50mL×1 瓶，该试剂有腐蚀性,尽量不要碰到

皮肤上，室温或 4℃保存 1 年。

试剂七：粉剂×1瓶，

4℃保存1年；临用前每瓶加双蒸水40mL

溶解，现用现配，配好后 4℃避光可保存一周；

试剂八：粉剂×1 瓶，4℃保存 1 年；每瓶加双蒸水 50mL 溶

解，溶解后 4℃保存 3 个月；

工作液一的配制：按试剂一：试剂二：试剂四=7:1:1 的比例

配制，现用现配。根据您的样本数，放宽 1-2 个

样本的量，需多少配多少。

工作液二的配制：按试剂一：试剂二：试剂三：试剂四=6:1:1:1

的比例配制，现用现配。根据您的样本数，放宽

1-2 个样本的量，需多少配多少。

定磷剂的配制：按双蒸水：试剂六:试剂七:试剂八=2:1:1:1

比例，先后顺序配制,现用现配,好后 4℃避光可保

存 48 小时。（配试剂所用器皿以及双蒸水，一定

严格防止磷污染）

试剂九：6mmol/L 磷标准贮备液 5mL×1 瓶，4℃冷藏 6 个月；

0.06mmol/L 磷标准应用液的配制：取 6mmol/L 磷标准贮备

液 0.05mL 用试剂五稀释至 5mL 即（100 倍稀释），

现用现配,配好后可保存 48 小时。

六、注意点：

1、血浆可能会出现混浊，如有混浊可 3500 转/分离心 10 分钟

取上清进行检测。与金属螯合的抗凝剂会干扰反应。肝素

抗凝不会影响。

2、如样本中酶活性偏低，可将酶促反应时间延长至 60 分钟，

亦可（计算公式相应改变）。

3、所用器皿严防磷污染，测试所用试管要求严格，要没有一

点磷，若试管放过磷酸或磷酸盐缓冲液，一定要洗得非常

干净，要先用清洁剂加水煮，再用自来水冲，最后用蒸馏

水冲干净。最好用一次性塑料试管（本所有售），避免磷污

染是检测成败的关键。

附录Ⅰ ：组织中 5´-NT 测定

一、样本前处理：

准确称取组织重量，按重量（g）:体积（mL）=1:9

的比例，加入 9 倍体积的生理盐水，冰水浴条件机械匀浆，

2500 转/分，离心 10 分钟，取上清液进行测定。

[注]：不可用含磷的试剂作为匀浆介质（例如 PBS），建

议用生理盐水。

附录Ⅱ：血清（浆）5'-NT 测定

一、样本前处理：血清（浆）直接取样进行检测。

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