小鼠白细胞介素10试剂盒的操作方法​

小鼠白细胞介素10试剂盒的操作方法

白介素10是一种多细胞源、多功能的细胞因子 ，调节细胞的生长与分化，参与炎性反应和免疫反应，是目前炎症与免疫抑制因子。在肿瘤、感染、造血系统及心血管系统中发挥重要作用 ，与血液、消化、尤其是心血管系统疾病密切相关。

在1989年，Mosmannand及他们的同事描述了一种新的免疫介质，由Th2细胞克隆分泌，能够抑制Th1细胞克隆IL-2和IFNr的合成。早期被命名为细胞因子合成抑制因子(CSIF)，这种因子后来被命名为IL-10，在这被发现的21年期间，很多研究深入剖析了这个细胞因子的生物学特性。

细胞的来源：

目前已知并非只有特定的T细胞亚群才能合成IL-10，几乎所有淋巴细胞均能合成IL-10。体内最重要的来源主要是单核巨噬细胞和T辅助细胞，此外，树突状细胞，B细胞，细胞毒性T细胞，γδT细胞，NK细胞，肥大细胞以及中性粒细胞和嗜酸性细胞也能合成IL-10，这些细胞分泌IL-10主要决定于特定的刺激，受损组织类型和某种免疫反应时间点。
单核巨噬细胞在各种内源性和外源性介质的作用下激活后分泌IL-10，如LPS(通过激活TLR4,TRAF3,NF-κBp65/p50,和ERK激酶)、儿茶酚胺(通过激活蛋白激酶A和CREB-1/ATF-1)引起IL-10基因转录。单核巨噬细胞在清除凋亡细胞过程中也会分泌IL-10，这一过程依赖于CD36和p38丝裂原激活蛋白(MAP)激酶，除了转录水平，等最近认为IL-10也被microRNA在转录后期所调节。

操作步骤：

1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀
释。
1000pg/ml 5 号标准品150μl 的原倍标准品加入150μl 标准品稀释液
500pg/ml 4 号标准品150μl 的5 号标准品加入150μl 标准品稀释液
250pg/ml 3 号标准品150μl 的4 号标准品加入150μl 标准品稀释液
125pg/ml 2 号标准品150μl 的3 号标准品加入150μl 标准品稀释液
62.5pg/ml 1 号标准品150μl 的2 号标准品加入150μl 标准品稀释液
2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待
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3
测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl， 然
后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不
触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。
4. 配液：将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30 秒后弃去，如此
重复5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7. 温育：操作同3。
8. 洗涤：操作同5。
9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
15 分钟.
10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。测定应在加终止液
后15 分钟以内进行。