植物组织直接PCR试剂盒检测原理

植物组织直接PCR试剂盒检测原理

产品用途

本试剂盒采用*的裂解缓冲液裂解组织(新鲜、冻存组织)，所得裂解物无需纯化即可作为模板，用抗抑制的2×Super direct PCR Taq Mix进行扩增，扩增产物可直接点样电泳。

产品特点

· 直接以裂解物为模板进行PCR，适用于样品高通量筛选。

· 扩增片段<2 kb 。

适用范围

非多糖、多酚植物。

操作步骤

请提前准备95℃的水浴或金属浴。

A：基因组DNA提取

1、取5 mg或0.5 cm2左右的植物组织样品，剪碎后加入50µl Buffer P1，吹吸或涡旋混匀。（注意：切勿加入过量叶片组织，以便酶解反应更顺利进行）。

2、95℃水浴或金属浴孵育10分钟。

3、加入50µl Buffer P2,混匀后直接作为模板进行PCR或置于4℃或-20℃保存。

B：PCR扩增

注意事项

· 样品避免反复冻融。

· 使用时试剂*化冻、混匀。

· 对于不易裂解组织(如蜡质叶片)，可以延长95℃的孵育时间至30分钟。

· 如扩增条带较弱，可适当增加模板用量或PCR循环数(不宜超过40个循环)。

· 如非特异扩增较多，可调整退火温度或适当增减模板用量。

· 提取物4℃可保存三个月，-20℃可保存六个月（避免反复冻融）。