细胞冻存液的使用说明！

细胞冻存液的使用说明！

细胞冻存是细胞保存的主要方法之一。利用冻存技术将细胞置于-196℃液氮中低温保存，可以使细胞暂时脱离生长状态而将其细胞特性保存起来，这样在需要的时候再复苏细胞用于实验。而且适度地保存一定量的细胞，可以防止因正在培养的细胞被污染或其他意外事件而使细胞丢种，起到了细胞保种的作用。

原理：

细胞冻存及复苏的基本原则是慢冻快融，实验证明这样可以大限度的保存细胞活力。如今细胞冻存多采用甘油或二甲基亚砜作保护剂，这两种物质能提高细胞膜对水的通透性，加上缓慢冷冻可使细胞内的水分渗出细胞外，减少细胞内冰晶的形成，从而减少由于冰晶形成造成的细胞损伤。复苏细胞应采用快速融化的方法，这样可以保证细胞外结晶在很短的时间内即融化，避免由于缓慢融化使水分渗入细胞内形成胞内再结晶对细胞造成损伤。

使用方法：

1、细胞冻存

（1）常规收集贴壁细胞或悬浮细胞至15ml无菌离心管；

（2）100-200g，离心5-10分钟，弃上清；

（3）计算出细胞总数和所需细胞冻存液的量。细胞的冻存密度一般为5×105~1×107cells/ml；

（4）加入适量细胞冻存液，用移液枪轻轻吹打以重悬细胞，分装于1.5ml或2ml细胞冻存管中，并做好标识；

（5）将细胞冻存管放置于可逐步降低温度的装置如程序性冻存盒内并放置在-80ºC冰箱内，确保冷却速度约为1ºC/min。通常冷却速度不宜快于0.5ºC/min；

（6）短期保存可放置在-80ºC冰箱内，若保存应转移至液氮中保存。

2、细胞复苏

（1）从液氮中取出冻存管，迅速置于37ºC水浴锅内，轻轻晃动(1分钟内)，直至*融化；

（2）将细胞悬液转移至15ml无菌离心管中，加入约5-10ml预热的*培养基，轻轻混匀；对于一些复苏效率很高的细胞也可直接将细胞悬液转移至离心管进行下一步骤的离心；

（3）100-200g，离心5-10分钟；

（4）确保细胞沉积于管底后，小心弃掉上清；

（5）加入适量预热的*培养基，轻轻吹匀后转移至培养器皿中，放入细胞培养箱中培养。

注意事项：

1、本产品需注意无菌操作，避免溶液被微生物污染；

2、请确保冻存前细胞生长情况良好，例如处于对数生的细胞，并且冻存时存活率大于90%；

3、建议细胞冻存在液氮中，可以长时间进行保存。如果置于-80ºC保存，保存时间大约为1年；

4、冻存和复苏用新配制的培养液。

5、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作