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谷草转氨酶(GOT)活性检测意义!
检测意义:
GOT( 2.6.1.1)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,催化可逆转氨基反应,是氨基酸代谢的重要酶。此外,GOT在心肌细胞中含量高,一般常作为心肌梗塞和心肌炎的辅助检查。肝脏损害时其血清浓度也可升高。
GOT催化 α-同戊二酸和天门冬氨酸发生转氨基反应,生成谷氨酸和草酰乙酸,草酰乙酸进一步自行脱羧生成丙酮酸;丙酮酸可与2,4-二硝基苯肼反应生成2,4-二硝基苯腙,在碱性条件下显棕红色;测定505nm吸光度的变化,即可计算GOT酶活力。
样品测定准备 :
1、 细胞或微生物样品的制备 :
先收集细胞或微生物样品到离心管内,弃上清,按照每250万细胞或微生物加入0.25mL提取液,超声波破碎细菌或细胞(功率20%,超声3s,间隔10s,重复30次)。3500g,4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
2、组织:
称取约0.05g组织,加入0.5mL提取液进冰浴行匀浆。3500g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
3、血清(浆)样品:直接检测。
生物试剂的使用常识:
(1)试剂切忌与手接触(有些试剂有强腐蚀性、等特性)。
(2)要用洁净的药勺,量筒或滴管取用试剂,绝对不允许用同一种工具同时连续取用多种试剂。取完一种试剂后,应将工具洗净(药勺要擦干)后,才可取用另一种试剂。
(3)试剂取用后一定要将瓶塞盖紧,不可放错瓶盖和滴管,绝不允许张冠李戴,用完后请及时将瓶放回原处,以免遗忘,带来不便。
(4)已取出的试剂不能再放回原试剂瓶内(怕产生原试剂的再次污染)。