胰岛素（INS）放免试剂盒使用详情

胰岛素(INS)放免试剂盒使用详情

胰岛素是由胰脏内的胰岛β细胞受内源性或外源性物质如葡萄糖、乳糖、核糖、精氨酸、胰高血糖素等的刺激而分泌的一种蛋白质激素。

[使用目的] 用于定量测定人血清或血浆中胰岛素（Ins）的浓度。

[用途] 胰岛素的测定主要用于对糖尿病的分型，即通过胰岛素释放实验，区分糖尿病的类型。 另外对于研究胰岛素β细胞的分泌功能、胰岛素瘤的分析、探讨冠心病机理等也有一定的意 义。

[试验原理] 本品采用了第二抗体＋聚已二醇沉淀法放射免疫分析试验原理：含胰岛素（Ins）的样 品和 125I 标记的胰岛素（Ins）与相应的抗体反应形成抗原抗体复合物。反应后加入二抗及 PEG，使免疫复合物沉淀，离心，测沉淀放射性计数。通过标准曲线得到样本中胰岛素（Ins） 的浓度。

[使用前准备] 试验前，恢复样本至室温，小心摇匀血清样本。 

[实验方法] 

1、 将实验所需试剂及样本放置室温，冻干品按操作要求进行溶解,平衡至少 30 分钟 以上才可进行操作； 
2、 取 60X12mm 聚苯乙烯管进行编号，所有实验均做双管重复； 
3、 每个 NSB 管加入 200µl 温育液，每个标准品“0”管 加入 100µl 温育液； 
4、 取每个浓度的标准品（A~F）、质控血清和样本 100µl 加入相应编号的试管中； 
5、 每管均各加入 100µl 标记物工作液； 
6、 每管均各加入 100µl 抗体工作液，充分混匀； 
7、 37℃温育 2 小时； 
8、 每管均各加入 500µl 分离剂后，充分混匀； 
9、 室温放置 15 分钟后，离心 3500 转／分，20 分钟后，吸去或倾倒掉上清液； 
10、 用 γ-计数器测定各管计数 CPM. 检测时间: 1 分钟； 
11、 从标准曲线上读取样本及质控血清的浓度。

[实验过程中应注意] 

1、 γ-计数器本底计数应≤100CPM/分，效率应≥75％； 
2、 加入放射性标记物时，应做好防护、小心谨慎，以避免造成放射性污染； 
3、 如果某一个样本的测定值高于高浓度的标准品浓度，用零标准品以 1：2 或 1： 4 的比例稀释样本后重新测试，测试结果乘以相应的稀释倍数。

[质量控制] 每次实验操作应至少采用两个浓度的质控血清进行质量控制，以确保每次实验测定结果 的可靠性。 100 100 

1、 质控血清的平均值应在允许范围内；
2、 曲线方程应采用拟合方式；
3、 重复样本的测定结果相差在 15％以内。 如不能同时满足以上条件，则此次试验结果无效，全部试验需重新进行。

[测定结果的计算] 

1、 计算标准品（A~F）、质控品和样品与标准品 0 的比值（B/B0）; 
2、 剂量-反应曲线按“对数剂量-结合率对数”（Log(dose-Log(B/Bmax))数学模型 或四参数数学模型拟合，通过每个标准品的 B/B0和其浓度建立标准曲线； 
3、 从标准曲线上查出样本的浓度值，B/B0不在标准曲线之内的样本及其浓度

 

胰岛素(INS)放免试剂盒实验过程需要注意这几步