海藻糖试剂盒操作详情

海藻糖试剂盒操作详情

产品说明：
海藻糖存在于大量有机体中，包括细菌、藻类、酵母、植物、昆虫和其他无脊椎动物。由于海
藻糖具有*的不同于其他碳水化合物的生物学特性，能在干旱、高温、脱水、冷冻、高渗透压及
毒性物质等恶劣环境下保护生物体细胞蛋白质、脂肪、糖类、核酸等组分不受损害

试验中所需的仪器和试剂：
可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿﹑研钵、浓硫酸和蒸馏水。

操作步骤：

一、海藻糖提取：
1、 细菌或细胞处理：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每 500 万细菌或细胞加入
1mL 提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率 20％，超声 3 秒，间隔 10 秒，重复 30 次），室温
静置 45min，振荡 3~5 次，冷却后，8000g，常温离心，取上清。
2、 组织的处理：称取约 0.1g 样本，常温研碎，加入 1mL 提取液，室温静置 45min，振荡 3~5 次，冷却后，8000g，常温离心，取上清。
3、 血清（浆）的处理：吸取约 100μL 血清（浆），加入 0.9mL 提取液，室温静置 45min，振荡 3~5次，冷却后，8000g，常温离心，取上清。
4、 标准品的处理：标准品用 1mL 双蒸水溶解，溶液浓度为 10mg/mL，稀释到 0.1、0.08、0.06、0.04、0.02、0mg/mL。

二、测定操作表：
1、 分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 620nm，蒸馏水调零。

2、 调节水浴锅至 95 度。

3、 工作液的配制：临用前在每瓶试剂一中加入 16mL 蒸馏水后，缓慢加入 64mL 浓硫酸，不断搅拌，充分溶解，待用。用不完的试剂 4℃保存一周。

4、 标准曲线的建立：取 0.25mL 标准液和 1mL 工作液至 EP 管中，95 度水浴 10min（盖紧，防止水分散失），自然冷却至室温，取 1mL 至比色皿中，在 620nm 处测吸光值 A。根据标准样本的浓
度（y）和吸光度（x）建立标准曲线。
5、 样本测定：取 0.25mL 样本和 1mL 工作液至 EP 管中，95 度水浴 10min（盖紧，防止水分散失），自然冷却至室温，取 1mL 至比色皿中，在 620nm 处测吸光值 A。

注意：若吸光值大于 1，请将样本用提取液稀释后再测定，计算公式中乘以相应的稀释倍数。

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