氯乙suanAS-D萘酚酯酶染色实验

氯乙suanAS-D萘酚酯酶染色实验
实验方法原理：细胞内酯酶水解合成的底物萘酚酯（一种萘的衍生物）而释放出萘酚，并迅速与重氮盐偶联结果在酶活性部位有明亮色彩的沉淀物出现

实验步骤：

一、实验试剂：

(一)底物混合液

（１）0.067mol/L  磷酸盐缓冲液（PH7.6）

（２）六偶氮化新品红（hexoliaed  new   fuchsin）溶液（新鲜配制）

①溶解新品红（new  fuchisn）1g于2mol/L盐酸液25ml中，溶液可保存。

②40g/L亚硝酸钠溶液，4℃保存，每周必须新鲜配制，使用前将等体积新品红溶液和40g/L亚硝酸钠溶液混合，反应1min此液好为六偶氮化新品红

③氯乙suan萘酚AS－D液：取氯乙suan萘酚AS－D（naphthol AS－D　hcloroacetate）5mg溶于N，N－二甲基酰胺N，N－dimeth for mamide）2.5ml中。

④将氯化萘酚AS－D溶液2.5ml和六偶氮化新品红0.25ml加至0.067mol/L磷酸盐缓冲液47.5ml中测PH值并调节至7.4不需要即可使用。

（二）复染液：取harris苏木素（含少量明矾）复染液100ml，加冰乙酸4ml，混匀。

（三）稀氨水洗液：每100ml蒸馏水中加入浓氨水（28%）0.2－0.3ml混匀。

二、 实验操作：

1. 将己固定好的血片或骨髓片放入底物混合液中，在高温温１育10min后，用流水冲洗．

2. 用复染液复染10min

3. 用稀氨水洗液冲洗玻片直至颜色由红变蓝

4. 迅速用流水冲洗，空气中干燥后油镜检查。

三、 实验结果判定：阳性反应为红色颗粒．定位于胞浆中