去内毒素质粒小量提取试剂盒使用方法！

去内毒素质粒小量提取试剂盒使用方法！

本试剂盒采用碱裂解法裂解细胞，根据离心吸附柱在高盐状态下特异性地结合溶液中的 DNA 的原理特异性提取质粒 DNA。 离心吸附柱中采用的硅基质材料能、专一地吸附 DNA，可大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。

本公司研制的内毒素清除剂，可大限度地除去内毒素。从 1-5ml 大肠杆菌 LB培养液中，可快速提取 5-15μg 高纯度质粒 DNA，提取率达 85-90%。使用本试剂盒提取的质粒 DNA 纯度高，可直接用于细胞转染等要求较高的实验，以及其他各种常规操作，包括酶切、PCR、测序、连接和转化等试验。

操作方法：

1、取 1-5ml 细菌培养物，12000rpm 离心 1min，吸除上清（菌液浓度较低时可多次离心收集到一个离心管中）。
2、向留有菌体沉淀的离心管中加入 200μl 溶液 P1(请先检查是否已加入 RNaseA），使用移液器或旋涡振荡器*悬浮细菌细胞沉淀。注意：如果菌块未*混匀，会影响裂解导致质粒提取量和纯度偏低。
3、向离心管中加入 200ul 溶液 P2，温和地上下翻转 6-8 次使菌体充分裂解。注意：混匀一定要温和，以免污染细菌基因组 DNA，此时菌液应变得清亮粘稠，作用时间不要超过 5 min，以免质粒受到破坏。

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使用注意：

1. 使用前请先检查溶液 P2、P3 和 P4 是否出现混浊，如有混浊现象，可在 37℃水浴中加热几分钟，待溶液恢复澄清后再使用。
2. 洗脱缓冲液体积不应少于 50ul，体积过小影响回收效率；洗脱液的 pH 值对洗脱效率也有影晌，若需要用水做洗脱液应保证其 pH 值在 8.0 左右(可用 NaOH 将水的 pH 值调至此范围)， pH 值低于 7. 0 会降低洗脱效率。DNA 产物应保存在-20℃，以防 DNA 降解。
3. 质粒 DNA 浓度＞1mg/ml 时清除内毒素效率降低。由于质粒 DNA 本身的性质，清除过程可导致部分质粒 DNA丢失，但内毒素却能得到大限度清除。
4. 所有溶液应用无内毒素的高纯水配制，所有器械材料均应不含内毒素，玻璃器皿可高温烘烤，非挥发性水溶液可高压处理。
5. DNA 浓度及纯度检测：得到的质粒 DNA 纯度与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。 得到的DNA 可用琼脂糖疑胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。 DNA 应在 OD260 处有显著吸收峰，OD260 值为1 相当于大约 50μg/ml 双链 DNA、 40μg/ml 单链 DNA。OD260/OD280 比值应为 1.7-1.9，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用去离子水，比值会偏低，因为 pH 值和离子存在会影响吸光值，但并不表示纯度低。

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