如何操作甲状腺球蛋白放免试剂盒?

甲状腺球蛋白放免试剂盒基本信息简介

甲状腺球蛋白是甲状腺滤泡上皮分泌的660 ku糖蛋白，每个Tg约有2个甲状腺素（T4）和0.5个三碘甲腺原氨酸（T3）分子，储存在滤泡腔中。溶酶体水解Tg表面T4、T3并使之释放入血，同时少量的Tg也释放入血，部分Tg经甲状腺淋巴管分泌入血。血循环中的Tg被肝脏的巨噬细胞清除。甲状腺球蛋白(Thyroglobulin，Tg)，是甲状腺滤泡上皮分泌的660 ku糖蛋白，每个Tg约有2个甲状腺素(T4)和0.5个三碘甲腺原氨酸(T3)分子，储存在滤泡腔中。溶酶体水解Tg表面T4、T3并使之释放入血，同时少量的Tg也释放入血，部分Tg经甲状腺淋巴管分泌入血。血循环中的Tg被肝脏的巨噬细胞清除。分泌因素，刺激Tg的分泌因素包括促甲状腺素(TSH)和胰岛素样生长因子-1(IGF-1);抑制因子是γ-干扰素、α-肿瘤坏死因子和维甲酸。Tg的分泌率为100 mg/(60。

甲状腺球蛋白放免试剂盒如何操作 

实验开始前，请提前配置好所有试剂，试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度过高时，用样品稀释液进行稀释，以使样品符合试剂盒的检测范围。

1. 加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl，余孔分别加标准品或待测样品100μl，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120分钟。

为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。

2.弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加生物素标记抗体工作液 100μl（取1μl生物素标记抗体加99μl生物素标记抗体稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制），37℃,60分钟。

3. 温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干。

4.每孔加辣根过氧化物酶标记亲和素工作液（同生物素标记抗体工作液） 100μl，37℃，60分钟。

5. 温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干。

6. 依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光显色（30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度蓝色，后3-4孔梯度不明显，即可终止）。

7.依序每孔加终止溶液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。

8. 用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。 在加终止液后15分钟以内进行检测。

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